免疫細胞化學在病理學中的應用最為廣泛，并取得了很大成果。
免疫細胞化學技術十分適合于病毒和病毒抗原在組織培養(yǎng)和機體細胞內的生長繁殖定位的觀察。
1．
2．先核后漿定位水痘、流感（甲、乙)、雞瘟、假狂犬病、單純皰疹、腺病毒2，3，4，5，7型，多型瘤、勞斯探氏肉瘤病毒，先在核復制，隨后在胞漿中定位。
3．先漿后核定位痘苗、脊髓灰質炎、麻疹等病毒是先在漿中復制，后進入細胞核。
4．
5．胞漿內定位腮腺炎、新城疫、仙臺病毒、流感、口蹄疫、鸚鵡熱、狂犬病、小鼠脫足病、痘苗、墨內山谷腦炎、馬腦炎、埃及101病毒、黃熱、乙型腦炎、痘病毒、天花等病毒。
用免疫細胞化學方法可以看到病毒從宿主的細胞到細胞，叢一個部位到另一個部位的擴散過程，如用免疫熒光技術看到了犬肝炎病毒的血行擴散；犬瘟熱病毒的淋巴和血行擴散。免疫熒光雙重染色法用以觀察雙重病毒感染，如蜱傳染毒（TBE)和麻疹病毒同時感染羊胚腎細胞，看到雙重感染細胞中病毒抗原和核酸的分布不同于單種病毒感染者。
用免疫細胞化學可以觀察腫瘤病毒和細胞，病毒抗原和腫瘤抗原之間的互相關系。如在不能查出傳染病毒的腫瘤細胞中發(fā)現了病毒抗原；在典型的肉瘤細胞胞漿中發(fā)現了勞斯（Rous)氏肉瘤病毒；對EB病毒與非洲淋巴瘤、鼻咽癌和白血病等的關系進行了有價值的研究，并發(fā)現了與Eb 病毒感染有關的兩類抗原，調查了某些疾病病人和正常人血清中抗EB病毒抗體的分布情況。王文亮等在原發(fā)性肝癌細胞中發(fā)現了乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg)和核心抗體。
五、病毒的快速診斷
免疫細胞化學為病毒感染性疾病的快速診斷開創(chuàng)了一個廣闊的道路（參見表16-2)，最先用免疫熒光法作流感病毒快速診斷，證明有較高的特異性。隨后，對流行性乙型腦炎，脊髓灰白質炎、呼吸道和肺炎腺病毒、皰疹病毒等進行了臨床快速診斷，提高了診治效果。近年，利用免疫細胞化學方法檢測EB病毒IgA抗體診斷鼻咽癌取得突破性成果，對于早期診治鼻咽癌作出了重大貢獻。在早期診斷流行性出血熱方面，免疫細胞化學方法更顯示了其優(yōu)越性，利用感染流行性出血熱病毒的細胞培養(yǎng)標本，可以在發(fā)病的早期查出IgM抗體，作出早期快速診斷。檢測患者血清中的抗體和效價，更有利于病毒感染性疾病的防治，也可直接檢查病變中的病毒。
表16-2 免疫細胞化學在病毒學的應用
| 疾病 | 檢出對象 | 標本 | 方法 | 敏感性 | 特異性 | 意義 |
| 各種立克次體病 | 抗體 | 血清 | IIF | 高 | 高 | 診斷 |
| 抗原 | 病變組織 | DIF | 中～高 | 高 | 流病 | |
| 調查 | ||||||
| 呼吸道病毒感染 | 抗（IgM，IgG，IgA)病毒（RS，流感甲、乙副流感1，3，4，6b，腺病毒組、麻疹、腮腺炎、風疹) | 血清、腦脊液、其它體液、鼻咽部洗液、呼吸道分泌物、病變組織、活檢及尸檢材料、組織培養(yǎng)材料 | IIF | 高 | 高 | 診斷 |
| IIF | 中～高 | 中～高 | 同上 | |||
| DIF | 診斷 | |||||
| 病毒性肝炎 | HBsAg | 血清、組織 | DIF | 高 | 高 | 輔診 |
| HBV | IIF | |||||
| HBcAg | 血清、組織 | IIF | 高 | 高 | 輔診 | |
| DIF | ||||||
| HAV | HA Ag | 肝活檢 | IIF | 高 | 高 | 研究 |
| 皰疹病毒感染 | ||||||
| 單純皰疹 | 抗原 | 皮膚刮屑 | IIF | 高 | 高 | 診斷 |
| 巨細胞病毒感染 | 抗體 | 血清 | IIF | 高 | 高 | 診斷 |
| ACIF | ||||||
| 帶狀皰疹 | 抗體 | 血清 | IIF ACIF | 高 | 高 | 輔診 |
| EB病毒感染 | 抗體 | 血清 | IIF | 高 | 低 | 輔診 |
| 狂犬病 | 抗原 | 犬腦 | DIF | 高 | 高 | 受傷人確診 |
| 抗體 | 血清 | IIF | 中 | 中 | 診斷 | |
| 蟲媒病毒感染 | 抗體 | 血清 | IIF | 高 | 高 | 診斷和流 |
| 馬腦炎 | 病調查 | |||||
| 登革、黃熱圣路易腦炎 | 抗體 | 血清 | IIF | 高 | 中 | 同上 |
| 乙型腦炎 | 抗體 | 血清jfsoft.net.cn/kuaiji/ | IIF | 高 | 高 | 診斷 |
| 無菌性腦炎 | 抗體 | 血清 | IIF | 高 | 高 | 診斷 |
| 出血熱、拉賽熱 | 抗體 | 血清 | IIF | 高 | 高 | 診斷流病 |
| AIDS病毒 | 抗體 | 血清 | IIF | 高 | 高 | 調查 |
注：ACIF：抗補體免疫熒光法：DIF：直接免疫熒光；IIF：間接免疫熒光（引自：黃策：免疫熒光和熒光免疫，1983)
作者等用免疫熒光和ABC法在人腎組織中發(fā)現了流行性出血熱病毒抗原。
免疫熒光細胞化學技術為病毒感染的快速診斷開辟了一條很有希望的道路，一方面可用于病原體檢出，另一方面可用于抗體的檢出。
（一)病毒的檢查
1．原發(fā)感染材料的直接制片檢查取病人或感染動物的末梢血液、尿、大便、脊髓液，咽喉鼻腔拭子、含嗽液、表皮病變滲出物、以及尸檢材料等。進行直接法免疫熒光染色檢查。可在2～3h以內得出初步結果。
2．組織培養(yǎng)物檢查將取自病人或感染動物的材料感染培養(yǎng)細胞，待病毒在細胞內發(fā)育繁殖到一定程度后才能作免疫熒光檢出，一般需10h以上。
3．接種動物感染材料檢查將取自病人的感染材料接種實驗動物如小鼠、雞胚，使其發(fā)病，然后以免疫細胞化學方法檢查實驗動物的各種感染標本。
（二)抗體的檢查
用已知病毒感染的細胞培養(yǎng)物為抗原，現酮固定10min，用病人待檢血清與抗原反應20min，再用抗人IgG和IgM熒光抗體分別染色30min，按常規(guī)洗滌、裱封、鏡檢。一般需在發(fā)病過程中，前后兩次檢查（急性期和恢復期各一次)，證明被檢血清的染色強度有4倍以升高時，方能確定診斷。它比常規(guī)血清學方法操作簡便，對有些病毒感染敏感性較高。張新生等利用金黃色葡萄球菌表面蛋白A（SPA)能與IgG的Fc段結合這一特點，用全菌體作為標記靶吸附病毒，形成花環(huán)狀結構，再用2%磷鎢酸負染色后在電鏡下觀察，操作簡便，易于推廣。
（三)常見病毒的快速檢查方法
1．乙型肝炎病毒抗原的快速檢查方法作者用免疫熒光間接法，PAP法和ABC法分別對人活體肝穿刺組織和尸檢的肝炎、肝硬化和肝癌組織、先用10%甲醛固定、石蠟包埋切片，進行了乙型肝炎病毒HBsAg、HBcAg 和HbcAb的檢查，在肝細胞、膽管上皮細胞和癌細胞內發(fā)現了這些抗原或抗體，對診斷和發(fā)病機理研究有重要意義。
2．狂犬病毒的快速檢查方法可直接檢查活檢和尸檢材料或查角膜印片中的狂犬病毒抗原，用直接法最成功。也可用間接法檢測IgM抗體進行早期診斷。最好用免疫熒光法。
3．皰疹病毒的快速檢查方法皰疹病毒（HSV)的抗原用直接免疫熒光檢查，常取眼結合膜細胞，皮膚刮片，活檢和尸檢材料。
4．巨細胞病毒的快速檢查方法用抗補體熒光抗體方法作此病毒抗原的特異性檢查，常取尿沉渣中的細胞涂片標本進行檢查。
5．流感病毒的快速檢查方法最早用免疫熒光法檢查流感病毒，一般采用直接法檢查鼻咽部脫落細胞涂片中的病毒抗原。也可用間接法檢測抗體，必須使用單價特異性羊抗人IgG熒光抗體，以避免與上皮細胞上的IgA發(fā)生非特異性熒光。
6．麻疹病毒的快速檢查方法檢查麻疹病人出疹前后的鼻咽部分泌物和眼結合膜中的細胞可快速檢出病毒抗原。也可用尿沉渣細胞標本直接法檢出抗原。用間接免疫熒光法可檢出病毒抗體作快速診斷。
7．流行性出血熱病毒快速檢查方法直接法檢查白細胞中的抗原，單克隆抗體可制備高效價的熒光抗體。用間接法可快速檢出病人IgM抗體，對病人進行早期診斷是我國的創(chuàng)新，世界衛(wèi)生組織向各國推薦。
8．愛滋病病毒抗體免疫熒光檢查方法目前常用以下方法檢查患者血清中的AIDS病毒抗體，對高危人群和可疑患者進行病毒抗體檢查具有重要的意義。
抗原片：將AIDS病毒感染的Hu-T-78細胞用PBS制成懸液，滴于玻片上，吹干，丙酮固定，裝入塑料袋中，密封，-40℃保存。陰性對照用Hu-T-78細胞，同上法滴片處理。
間接免疫熒光檢查法。
（1)先將待檢血清用PBS作1：16稀釋，取30μl滴加在抗原片上，jfsoft.net.cn放入濕盒，37。C30min。
（2)用0.01mol/L,PBSPh7.0洗滌2次，每次3min。
（3)滴抗人IgG熒光抗體，濕盒37℃3min。
（4)PBS洗2次，每次3min。
（5)緩沖甘油封片，熒光顯微鏡檢查。
結果：抗原片細胞漿內出現彌散熒光，陰性對照無熒光。
9．其他病毒的快速檢查方法腺病，帶狀皰疹病毒，付流感病毒，流行性腮腺炎病毒，呼吸道細胞病毒，風疹病毒，腸道病毒，乙腦病毒，森林腦炎病毒，登革熱病毒等已有報告用免疫熒光法檢查抗原或抗體作快速診斷。
