原位雜交技術(shù)在染色體和電鏡水平的應用

原位雜交免疫細胞化學技術(shù)的應用除在培養(yǎng)的離散細胞涂片和各種組織制片如恒冷箱冷凍切片、石蠟包埋切片外，又進一步擴展到染色體鋪片和電鏡水平。現(xiàn)分別予以介紹。[詳細]

2007/12/3 11:03:45

原位雜交技術(shù)在染色體鋪片的應用

近年，不少科技工作者將原位雜交組織細胞化學技術(shù)（ISHH）應用于細胞分裂中期（Metaphase）和分裂間期（Interphase）的染色體鋪片上，利用標記的核苷酸探針與之進行雜交，可在光鏡或電鏡水平檢測到不同的特異性的標記物。目前，原位雜交組織化學在染色體鋪片的應用主要在三個方面：染色體的基因分配[詳細]

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原位分子雜交技術(shù)在電鏡水平的應用

自Gall和Pardue建立了原位雜交技術(shù)以來近20余年內(nèi)，這一技術(shù)為基因的定位和表達、基因進化、發(fā)育生物學、腫瘤學、微生物學、病毒學、醫(yī)學遺傳學和遺傳分析等領(lǐng)域研究提供了極其寶貴的資料，發(fā)揮了其它技術(shù)難以取代的作用。近年來，此一技術(shù)的應用領(lǐng)域逐漸擴大并在兩個主要進行了技術(shù)法的改進。一方面是應用一系[詳細]

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聚合酶鏈反應（PCR）技術(shù)的發(fā)展和應用概述

聚合酶鏈反應或多聚酶鏈反應（Polymerase Chain Reaction, PCR），又稱無細胞克隆技術(shù)(“free bacteria”cloning technique)，是一種對特定的DNA片段在體外進行快速擴增的新方法。該方法一改傳統(tǒng)分子克隆技術(shù)的模式，不通過活細胞，操作簡便，在數(shù)小時內(nèi)[詳細]

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PCR技術(shù)的原理

PCR是體外酶促合成特異DNA片段的新方法，主要由高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個步驟反復的熱循環(huán)構(gòu)成：即在高溫（95℃）下，待擴增的靶DNA雙鏈受熱變性成為兩條單鏈DNA模板；而后在低溫（37～55℃）情況下，兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補的單鏈DNA模板結(jié)合，形成部分雙鏈；在Taq酶的最適溫度[詳細]

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PCR操作范例及反應體系的組成

一、PCR操作范例　　在一個典型的PCR反應體系中需加入：適宜的緩沖液、微量的模板DNA、4×dNTPs、耐熱性多聚酶、Mg2+和兩個合成的DNA引物。模板DNa 94℃變性1min，引物與模板40～60℃退火1min，72℃延伸2min。在首次循環(huán)前模板預變性3～5min；在末次循環(huán)后，樣品仍需繼[詳細]

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影響PCR的主要因素

PCR技術(shù)必須有人工合成的合理引物和提取的樣品DNA，然后才進行自動熱循環(huán)，最后進行產(chǎn)物鑒定與分析。引物設(shè)計與合成目前只能在少數(shù)技術(shù)力量較強的研究院、所進行，臨床應用只需購買PCR檢測試劑盒就可開展工作，PCR自動熱循環(huán)中影響因素很多，對不同的DNA樣品，PCR反應中各種成份加入量和溫度循環(huán)參數(shù)均不[詳細]

2007/12/3 11:03:41

PCR各處應用模式

一、兼并引物（Degenerate Primer）PCR　　密碼子具有兼并性，如表22-4，單以氨基酸順序推測編碼的DNA序列是不精確的，但可以設(shè)計成對兼并引物，擴增所有編碼已知順序的核酸序列。用兼并引物時寡核苷酸中核苷酸序列可以改變，但核苷酸的數(shù)量應相同。兼并度越低，產(chǎn)物特異性越強，設(shè)計引物時應盡[詳細]

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樣品處理與注意事項

一、樣品處理　　DNA是染色體的主要組成部分，是PCR的擴增模板。要進行PCR，研究DNA結(jié)構(gòu)與功能或者用于診斷目的，首先必須從生物體內(nèi)提取DNA。DNA往往以核蛋白形式存在，其分子量大（人的染色體DNA平均大小為3.0×109bp），提取DNA應盡量保持DNA完整性和純度，即在提取中盡量避免機械張[詳細]

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PCR儀器的發(fā)展

PCR溫度循環(huán)至關(guān)重要，PCR擴增儀各參數(shù)必須準確。自Perkin –Elmer Cetus公司第一臺PCR擴增儀問世以來，現(xiàn)已有幾十家不同的廠家在國內(nèi)外生產(chǎn)和銷售PCR擴增儀。在短短的幾年間，擴增儀經(jīng)過幾代的發(fā)展，不斷采用新技術(shù)，并且進一步朝方便、實用、高智能化和自動化的方向發(fā)展。　　為了便于了解[詳細]

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PCR臨床應用領(lǐng)域及特點

一、PCR應用特點　　1．操作簡便目前PCR技術(shù)采用耐高溫Taq DNA聚合酶，并且在有電腦控制的DNA擴增儀中進行，使操作大為簡化，一次加入的酶即可滿足反應全過程。DNA擴增儀能自動迅速升降溫度，只需把反應所需的全部材料混勻，置入儀器內(nèi)，反應便依所輸入的程序進行�！　�2．省時應用TaqDNA聚合酶[詳細]

2007/12/3 11:03:38

其它鏈擴增技術(shù)及應用范圍

一、免疫PCR　　所謂免疫（Immune PCR）就是利用抗體與DNA特異結(jié)合來檢測抗原，把抗原抗體反應與PCR聯(lián)合應用而建立的一種抗原檢測系統(tǒng)�！　≡诿庖逷CR中，一個中介分子同時具有與DNA、抗體分子特異結(jié)合的能力。其一端連接DNA（標記物），另一端連接抗原-抗體復合物，形成一個特殊的抗原-抗體[詳細]

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DNA重組技術(shù)及其在基因診斷中的應用

基因工程的基本技術(shù)是人工進行基因的剪切、拼接、組合�；蚴且欢尉哂幸欢üδ艿腄NA分子，要把不同基因的DNA線形分子片段準確地切出來，需要各種限制性核酸內(nèi)切酶（restriction endonuclease）；要把不同片段連接起來，需要DNA連接酶（ligase）；要結(jié)合基因或其中的一個片段，需要[詳細]

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分子克隆載體

載體（vector）是指運載外源DNA有效進入受體細胞內(nèi)的工具。載體同外源DNA在體外重組成DNA重組分子，在進入受體后形成一個復制子，即形成在細胞內(nèi)能獨自進行自我復制的遺傳因子。因此，作為載體應該滿足以下幾方面的要求：①有某種限制酶的一個切點，最好是有許多種限制酶的切點，而且每種酶的切點只有一個；[詳細]

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DNA重組實驗中常用的技術(shù)

一、質(zhì)粒DNA的提取及鑒定　　（一）質(zhì)粒DNA的提取及鑒定　　1．收獲細菌　�。�1）將2ml含相應抗生素的LB液體培養(yǎng)基加入到通氣良好的15ml的試管中，接入一單菌落，于37℃劇烈振蕩培養(yǎng)過夜�！　。�2）將1.5ml培養(yǎng)物倒入1.5ml離心管中，用臺式離心機于4℃以12000g離心5min，將剩余的[詳細]

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遺傳病與腫瘤的基因診斷

從DNA水平上尋找確診遺傳病的指標或探討遺傳病和腫瘤的病因等方面，已取得很大成績，這對產(chǎn)前診斷，早期確診和突變基因攜帶者的檢出等都有重要意義。所用的方法大體有以下幾種�！　∫�、分離基因進行結(jié)構(gòu)分析　　利用DNA離體轉(zhuǎn)化，制備探針，制備基因文庫進行篩檢，最后鑒定載體中插入DNA片段的特性等一系列技術(shù)，[詳細]

2007/12/3 11:03:33

“DNA指紋”與法醫(yī)鑒定

1979年Teffreys根據(jù)β珠蛋白基因座位近旁出現(xiàn)的RFLP頻率同測定的核苷酸總數(shù)，推算出人體基因組的遺傳異質(zhì)性約為每100個核苷酸中有一個差異。后在人體DNA隨機片段的文庫中分離出高度變異的超變區(qū)。從1982年起，分別在人的胰島素基因，α類珠蛋白基因，肌動蛋白基因和C-Ha-ras-1基因中陸[詳細]

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免疫細胞化學常用試劑介紹

一、固定劑　　大多數(shù)神經(jīng)激素、肽類物質(zhì)為水溶性，在用于免疫細胞化學研究之前，常需固定。但肽類和蛋白質(zhì)的物理、化學性質(zhì)不同，因而對不同的固定方法或固定劑的反應也不盡相同。某些固定劑甚至可同時破壞和/或保護同一抗原的不同抗原決定簇。因此，在進行免疫細胞化學研究之前，很有必要了解所要研究的物質(zhì)（蛋白質(zhì)或肽[詳細]

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原位雜交組織化學常用試劑及處理

一、雜交前準備　�。ㄒ唬〥EPC水是經(jīng)DEPC處理過的滅菌蒸餾水�！　EPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可滅活各種蛋白質(zhì)，是RNA酶的強抑制劑。原位雜交在雜交及其以前的各步處理中，所有液體試劑都應經(jīng)DEPC處理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待處理水（蒸餾[詳細]

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全血細胞培養(yǎng)染色體技術(shù)常用試劑配制

一、國內(nèi)實驗室應用試劑配制　�。ㄒ唬┡囵B(yǎng)液　　（1）RPMI1640培養(yǎng)液：稱取RPMI培養(yǎng)基9.8g，碳酸氫鈉1.9g、青霉素100u/ml，加雙蒸水至1000ml，調(diào)節(jié)　pH7.2～7.4無菌過濾凍存?zhèn)溆��！　。?）小牛血清商品：成都生物制品廠�！　。�3）植物凝集素（PHA）：自制或成品（重慶藥[詳細]

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