�。�2)FCM測定B細胞的臨床指證：
�、倜庖呷毕�；免疫缺陷可以是先天性或獲得性的。低丙種球蛋白白血癥和無丙種球蛋白白血癥常伴有免疫球蛋白分泌的紊亂，因此有必要分析B細胞。
②淋巴瘤：非何杰金氏病的淋巴病，80%來源于B細胞。因而一旦懷疑為淋巴瘤，就應仔細用FCM對B細胞的表現(xiàn)型進行分析，可以分析血、骨髓、以及活檢淋巴結(jié)等。首先確定腫瘤細胞的來源：B細胞性（CD20+，SIg+)或T細胞性（CD3+)。也有可能某些淋巴病來源于單核細胞（CD11+)成裸細胞而表現(xiàn)出非T非B。一旦確立為B細胞來源后，就應更進一步分析克隆增殖的性質(zhì)：單克隆、少克隆、或是多克降珠。單克隆性的增殖往往是腫瘤的標志�？梢杂肧Ig的輕鏈和重鏈分別加以測試，往往輕鏈比重鏈更有價值。在不久的將來，或許可以直接用免疫球蛋白的基本加以鑒別。
對B細胞亞群的確定，目前并未定論，但某些B細胞被CD5（T1，OKT1)染色。正常B細胞中這些細胞較少，而多見于慢性淋巴性白血病和骨髓移植后的免疫缺陷時期。在B細胞的腫瘤病人中，10%的也可以出現(xiàn)CD20（B1)陰性反應，這是B細胞成熟而將分化為漿細胞的標志。在異常B細胞上，往往有一些B細胞的標記缺失或其它表現(xiàn)型出現(xiàn)，因而對異常B細胞的FCM的分析尤為重要。圖10-17顯示CD19—FITc （B細胞)和CD5-PE（T細胞)雙染色的假三維圖像分析。X軸為綠色熒光的Leu12(B細胞)，Y軸為紅色熒光的PE—Leu1(T細胞)。從圖中可見，有較多的細胞表現(xiàn)出Leu12+t Leu1+,陰性區(qū)內(nèi)為NK細胞和紅細胞等。
圖10-17 異常B細胞雙染色的假三維圖
�。�3)k-λ測定B細胞克�。簁、λ測定法是一種從正常B細胞中測定少量B細胞克隆生長的方法。其基本原理是：若有B細胞克隆存在，將改變某一種輕鏈（k或λ)的熒光強度的分布。若輕鏈為k的B細胞生長，則抗k的抗體能測試出這種變化，而抗λ的抗體的測試沒有任何改變。正常情況下，B細胞的k和λ的熒光強度分布是一致的（見圖10-18)。
圖10-18 k-λ克隆的測定
正常情況，B細胞輕鏈分布圖像，一致κ和λ的波形沒有區(qū)別。但在異常時，若有單克隆生長，κ鏈有分布則與λ不一致，在總和的曲線形態(tài)上也會產(chǎn)生差異。
在實際應用中，血液、體液、組織細胞的懸浮液效果均較好，而對于骨髓，大量細胞的非特異性標記會影響測定的結(jié)果。這里面必須強調(diào)，正常B細胞中的克隆細胞生長并不意味著它們必然是腫瘤細胞，還必須結(jié)合其它指標再做結(jié)論。不過這種方法對確定腫瘤細胞的存在、細胞發(fā)育階段、以及經(jīng)治療后病情控制的狀況等，都可以提供一些有用的資料。
以上僅限于從外周血的白細胞分析這一側(cè)面介紹了FCM的某些疾病中的臨床應用。其實，它也僅只是問題的一個部分。例如，有研究工作表明：CD34抗原在由紅系、巨核系、粒系和巨噬細胞三個細胞成株單元組成的成株細胞中有所表現(xiàn)。CD34+細胞在人的骨髓細胞中約占1～4%，而在外周血中卻探測不到。又如，NK細胞近來被認為可能和人類的某些疾病的發(fā)病機理有關(guān)，對NK細胞的測量可以作為免疫治療的免疫監(jiān)測的重要參數(shù)和有效的預后征狀的指示。以前是用放射性的51Cr的釋放來檢測NK敏感的靶細胞的毒理學活性從而評估NK的功能的，而采用熒光探針CFDA（car－boxy—fluorescein diacetate)標記則可用FCM技術(shù)更為安全可靠地進行測定。有報告指出，健康男人的數(shù)值為（67.1±22.7%)%，健康女人為（63.9±20.0%)；患有婦科癌腫病人則為（38.5±23.1)%,明顯偏低。這些工作表明，F(xiàn)CM的技術(shù)從免疫組織化學角度還會有所發(fā)展。在第二節(jié) 我們曾簡單介紹了流式細胞分析技術(shù)在生物醫(yī)學工程中應用的一些技術(shù)途徑，這也可以啟發(fā)我們借助于FCM來提高免疫組織化學的分析能力。可以預見，F(xiàn)CM一定會成為免疫組織化學的一項重要的技術(shù)工具，并將在醫(yī)學科研和臨床應用中發(fā)揮更大的作用。
附【美國Becton –Dickinson 公司可提供的FCM標準】熒光微球（Fluorescent beads)；雞紅細胞核（Chicken erythrocyte nu－clei)和小牛胸腺細胞核（Calf thymocyte nuclei)，用于DNA測量的質(zhì)量控制；單克隆抗體試劑；以及用于免疫表型（immunopheno－typing)和其它臨床應用的藥盒。
