由上可見，在分析紅細(xì)胞溶解后的全血時(shí)，必須先采用雙指標(biāo)二維點(diǎn)圖。從圖上也可清楚地看出，粒細(xì)胞、未被溶解的紅細(xì)胞和一些渣滓，由于不同的體積和致密度，明顯地區(qū)別于淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞從而能把它們分開。看到清楚的細(xì)胞分群以后，可以在計(jì)算機(jī)的顯示屏上將所要分析的細(xì)胞畫線框出，并通過指令送入存貯器，以后就可只對框出部分做各種數(shù)據(jù)分析和深入考查。圖10-11就是對雙指標(biāo)點(diǎn)圖上的淋巴細(xì)胞群框定的示意圖。數(shù)字所表示的意思和圖10-9相同。
圖10-10 外周血白細(xì)胞及PBMC的單指標(biāo)直方圖
圖10-11 雙指標(biāo)點(diǎn)圖上細(xì)胞的框定
2．單維直方圖上陰性分界游標(biāo)設(shè)置前面已經(jīng)強(qiáng)調(diào)，在用FCM分析時(shí)，陰性對照是必不可少的。首先用非染色細(xì)胞，根據(jù)前面介紹的雙指標(biāo)二維點(diǎn)圖的辦法，將某一細(xì)胞群框定；然后分別選用綠色熒光（GFL)和紅色熒光（RFL)單指標(biāo)直方圖。在直方圖上所出現(xiàn)的細(xì)胞均為陽性�？捎酶淖僄FL和RFL增益的辦法，將細(xì)胞恰好調(diào)節(jié) 到左側(cè)并設(shè)立游標(biāo)（圖10-12)。
然后再測試MsIg染色的陰性對照。某些細(xì)胞，由于膜上的Fc受體可以與對照抗體鼠Ig非特異性結(jié)合，因而有一定的背景染色，不過這種陽性百分率不應(yīng)超過5%。所以MsIg與非染色細(xì)胞的分界游標(biāo)確立后，以后所測試的標(biāo)本以此為標(biāo)準(zhǔn)，游標(biāo)位置基本不變。
圖10-12 陰陽性細(xì)胞分界游標(biāo)的設(shè)置
MsIg的紅、綠熒光陰陽性分界游標(biāo)確立以后，可以測試實(shí)驗(yàn)標(biāo)本。首先檢查細(xì)胞分群情況，然后檢查淋巴細(xì)胞群是否落在已輸入計(jì)算機(jī)的淋巴細(xì)胞框定的范圍里。若染色及FCM的工作性能都正常，則框定的位置不會(huì)改變。然后轉(zhuǎn)換成熒光直方圖。若為FITC標(biāo)記的細(xì)胞，則GFL為X軸；若為PE標(biāo)記的細(xì)胞，則用RFL為X軸。由于陰陽性分界游標(biāo)記已確立，細(xì)胞陽性率及圖像均顯示于計(jì)算機(jī)熒光屏上；同時(shí)也可選用其它指標(biāo)和圖像、打印所需的資料等。
