流式細胞術對外周血白細胞的免疫熒光分析

　　三、淋巴細胞亞群的測定及其在臨床醫(yī)學中的實用意義

　　淋巴細胞由于表面特異性抗原的差異可分為四大類（表10-3)，這些不同抗原表現(xiàn)型的亞群執(zhí)行不同的機能。而且某些疾病會選擇性地損傷某些亞群而造成亞群之間的比例失調。根據(jù)FCM雙熒光分析的結果，現(xiàn)將不同的抗原和不同的機能的淋巴細胞亞群列于表10-4。

表10-13 主要淋巴細胞亞群的表面抗原

　�。�：表現(xiàn)的抗原；－：未表現(xiàn)的抗原；＋／－：主要亞群有表現(xiàn)的抗原；－／＋：抗原僅表現(xiàn)于少數(shù)亞群。

表10－14　淋巴細胞機能性亞群

　　外周血白細胞的機能，特別是淋巴細胞的機能狀態(tài)在一定程度上反應了機體的免疫機能。近幾年來，用FCM來測定某些疾病的淋巴細胞及其亞群已成為重要的診斷和預后判斷的指標，如對骨髓、器官移植，白血病、淋巴瘤的診斷和對免疫缺陷病的估價等。測定淋巴細胞亞群的主要依據(jù)是在于淋巴細胞表面不同的抗原表現(xiàn)型，而這些表現(xiàn)型又依賴于相應的單克隆抗體而被識別。所以，特異性很高的單克隆抗體結合先進的FCM，已為臨床提供了不少非常有用而重要的資料，但被FCM所分析的淋巴細胞的整個臨床意義尚未完全認識清楚。隨著更多確定淋巴細胞表現(xiàn)型的試劑的應用，F(xiàn)CM對診斷和治療計劃的擬定以及預后的估計將會表現(xiàn)出更重要的實用意義。

　　1．T淋巴細胞亞群的測定如前所述，在使用FCM分析時，先用0^。散射和90^。光散射雙指標將白細胞分為三群：淋巴細胞、單核細胞和粒細胞。在二維點圖上劃出淋巴細胞群范圍后，設立GFL的RFL單指標的直方圖。命電子計算機僅計數(shù)所輸入的淋巴細胞，即劃線框出的那部分細胞。一般計數(shù)輸入的細胞可設1000～5000個。直方圖的分析可顯示陽性細胞的百分率。應用輸入細胞數(shù)、陽性細胞百分數(shù)以及白細胞分類計數(shù)，就能得到陽性細胞的絕對值，即每立方毫米血液中的絕對值。有時T淋巴細胞某亞群的絕對值比百分率更為重要，因為它可以表明T細胞某亞群的增高和減少。當然，淋巴細胞占白細胞的百分數(shù)也是一個重要數(shù)據(jù)，應當準確測出。

　　CD₄/CD₈細胞的比值，有時也用于反映病人淋巴系統(tǒng)的機能狀態(tài)。不少臨床免疫實驗室已把CD₄/CD₈的值作為常規(guī)血檢查的項目。在國際上，淋巴細胞亞群以及CD₄/CD₈并未建立統(tǒng)一數(shù)值，各實驗室均需建立自己的標準。平均值一般為1.73～2.00。

　　一般而言，影響淋巴細胞亞群的因素較多，如年齡、性別、種族、以及外周圍環(huán)境如季節(jié)　、藥品等的影響。T細胞的絕對值在兒童略高于成人。嬰兒CD₄細胞的百分率較成年人高；老年人的CD₈略低。正常人在一晝夜內也有周期性的波動：上午CD₄略低，下午4時之后開始增加，直至次晨，平均波動為15%～20%。盡管正常情況下淋巴細胞亞群有所變動，但仍屬正常范圍。某些疾病，如器官移植、免疫疾病、免疫抑制和一些淋巴細胞腫瘤，其淋巴細胞亞群及其比值測量結果均可能偏離正常范圍。

　　有工作報道，傳統(tǒng)的T輔助誘導細胞（CD₄⁺)具有抑制機能，而在T抑制細胞毒細胞（CD₄⁺)中，有些又具有協(xié)助的功能。因此，對原來設想的CD₄、CD₈的機能分群有所混淆。預計會有新的單克隆抗體再從CD₄和CD₈的細胞中分出。不過就目前看來，不少臨床免疫實驗室已用CD₄/CD₈比值結合淋巴細胞絕對值對多種疾病的診斷、治療和預后的估計提供了不少有價值的資料。

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