中國幽門螺桿菌研究:美藍染色檢查胃粘膜幽門螺桿菌

自從1983年Marshall報告幽門螺桿菌（Hylicwww.med126.comobacter Pylori，Hp)以來，各國學者對其研究極為火熱，它明確Hp與慢性胃炎，消化性潰瘍的發(fā)生，發(fā)展及復發(fā)相關。近年甚至認為Hp感染與胃癌相關。因而尋找一個簡便而有效的Hp檢查方法日益受到重視。我們在實踐中摸索出的美藍染色效果較好，并與尿素酶試驗，細菌培養(yǎng)，Warthin－Starry銀染色法及HE染色法進行了比較，現(xiàn)報告如下。

1　材料和方法

1.1　材料

無選擇地對因有消化不良等上消化道癥狀來院作纖維胃鏡檢查者作快速Hp尿素素酶試驗（用福建三強公司Hp藥盒)。分別取尿素酶試驗陽性者100例及陰性者50例作胃竇粘膜活組織菌培養(yǎng)及組織切片HE染色，Warthin－Starry銀染色及美藍染色檢查Hp。

1.2　細菌培養(yǎng)

取胃粘膜活組織研碎，于1h內jfsoft.net.cn接種在加有兩性霉素，萬古霉素，TMP的血瓊脂培養(yǎng)基上，置37℃和微需氧條件下培養(yǎng)4—7d，3d后即開始觀察細菌生長情況；根據(jù)菌落特征，革藍染色，尿素酶試驗等實驗加以鑒定，若7d后培養(yǎng)仍無細菌生長，則為陰性。

1.3　HE及Warthin－Starry銀染色

石蠟切片脫蠟入水后常規(guī)HE染色Warthin－Starry銀染色參照Warthin法進行。

1.4　美藍染色

石蠟切片常規(guī)脫蠟入水后用0.03％美藍溶液染0.5min～2min（視染液新舊而定)，然后自來水清洗，再常規(guī)脫水，透明樹膠封固，最后閱片。

2　結果

經尿素酶試驗，Warthin－Starry染色，美藍染色，HE染色及細菌培養(yǎng)等5種方法檢查Hp結果見表1。

表1　組織切片染色法檢查Hp結查

美藍染色鏡下觀察Hp呈藍色，胃粘膜上皮，胞漿及分泌物呈淡藍色，固有膜，結締組織呈深藍色。Hp呈彎曲狀，S狀、短弧狀及桿狀，位于胃小凹或胃小凹分泌物中，亦可見于上皮細胞漿中。HE染色細菌著色淺淡，鏡檢時需非常仔細找才能發(fā)現(xiàn)。Warthin－Starry銀染色細菌被染成淺黑色，組織背景呈黃棕色，易于辨認。

3　討論

在作胃鏡檢查的同時取粘膜活組織作Hp檢查是目前常用的檢查Hp的途徑。其中尿素酶試驗方法簡便但不能直接觀察細菌，可出現(xiàn)假陽性及假陰性，常被用來作初步篩選之用，或被沒有病理檢查條件的基層單位所采用。細菌培養(yǎng)結果可靠，但費時太久，亦有假陽性存在，除非對已知有Hp感染而常規(guī)治療失敗者，一般臨床未作常規(guī)檢查。胃粘膜活組織切片染色鏡檢，以其直觀準確，不需在病理活檢以外另取活組織而受到重視。但常規(guī)病理切片的HE染色時Hp著色淺淡，不僅觀察困難而且常容易漏診。經典的Warthin－Starry銀染色法，細菌與組織對比度強，觀察容易準確率高，但染色過程繁鎖，費時，顯色時間也較難掌握，也很難作為臨床常規(guī)使用。

我們在實路中摸索的美藍染色，染色操作簡便，快速，細菌與組織背景對比明顯，用高倍光學顯微鏡即可清晰地辨認出Hp來，結果可靠，準確率高，值得推廣應用。