張平 包麗芬 8 中華現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)雜志 2005年9月 第3卷 第18期
【摘要】 目的 掌握HIV特異性抗體檢測(cè)、質(zhì)量控制及獻(xiàn)血員HIV篩選的基本知識(shí)。方法 初篩試驗(yàn)ELISA（雙抗原夾心法)和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)（免疫印跡法)。結(jié)果 HIV抗體確認(rèn)檢測(cè)是獻(xiàn)血員HIV篩選的重要依據(jù)。結(jié)論 掌握獻(xiàn)血員HIV篩選的基本知識(shí)，可為保證輸血質(zhì)量、輸血安全提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】 HIV檢測(cè)；質(zhì)量控制；獻(xiàn)血員HIV篩選
通過HIV特異性抗體、抗原、核酸及病毒分離檢測(cè)來確定HIV感染，WHO和我國衛(wèi)生部推薦使用HIV感染診斷方法，是血清學(xué)抗體檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)室選用ELISA夾心法（阿克蘇)來進(jìn)行抗體測(cè)定初篩，同時(shí)做好實(shí)驗(yàn)前、中、后質(zhì)量控制，來保證整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程工作的可靠性。因此掌握獻(xiàn)血員HIV篩選的基本知識(shí)，可為保證輸血質(zhì)量、輸血安全提供理論依據(jù)。
1 HIV檢測(cè)特殊性和文件管理要求
HIV檢測(cè)必須嚴(yán)格按國家制定的《艾滋病檢測(cè)工作管理辦法》和《艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》進(jìn)行，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)有嚴(yán)格的質(zhì)量保證體系。建立標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件（SOP)；建立實(shí)驗(yàn)原始記錄表；建立HIV抗體檢測(cè)程序；填寫檢測(cè)結(jié)果表；建立標(biāo)本的登記記錄；做好實(shí)驗(yàn)前、中、后的質(zhì)量控制工作。
2 HIV檢驗(yàn)?zāi)康募爸饕R床意義
檢驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^HIV特異性抗體、抗原、核酸及病毒分離檢測(cè)來確定HIV感染，WHO和我國衛(wèi)生部推薦使用HIV感染診斷方法，是血清學(xué)抗體檢測(cè)。（1)HIV核酸檢測(cè)只能作為HIV感染的輔助性指標(biāo)，但最終要追蹤抗體檢測(cè)。尤其在感染HIV的窗口期，能及早給予發(fā)現(xiàn)HIV感染。主要用于獻(xiàn)血員HIV感染窗口期的篩查。（2)P24抗原檢測(cè)的臨床價(jià)值還有待于臨床實(shí)踐來評(píng)估。HIV抗體確認(rèn)檢測(cè)才是HIV/AIDS診斷的唯一依據(jù)。
3 HIV抗體初篩檢測(cè)［1，2］
HIV抗體初篩檢測(cè)常用試驗(yàn)有金標(biāo)法、ELISA等方法。ELISA法有間接法、競爭法、夾心法。本實(shí)驗(yàn)室選用阿克蘇ELISA夾心法為例。
3.1 阿克蘇夾心法原理 將HIV抗原包被固相載體上，標(biāo)本中HIV抗體與醫(yī)學(xué)全.在線jfsoft.net.cn包被的HIV抗原結(jié)合形成復(fù)合物，利用抗體的多價(jià)性。又與酶（HRP)標(biāo)記的同類HIV抗原即酶標(biāo)板內(nèi)的球狀復(fù)合物，形成一個(gè)HIV抗原抗體酶標(biāo)記的HIV抗原復(fù)合物，最后加入底物，避光30min，在酶作用下，產(chǎn)生顯色反應(yīng)，加2N硫酸終止后呈黃色，在450/620nm雙波長下測(cè)定光密度值。
3.2 試劑質(zhì)量要求 必須是HIV1+2混合型；經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)，批檢合格，臨床評(píng)估質(zhì)量優(yōu)良，在有效期內(nèi)試劑。
3.3 操作程序 詳見試劑操作說明書。
3.4 質(zhì)量控制 內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清，每次試驗(yàn)試劑盒中提供陰、陽性對(duì)照。外部對(duì)照質(zhì)控血清，理想的外部對(duì)照應(yīng)該包括陰、陽性對(duì)照、弱陽性、臨界值對(duì)照，在每次試驗(yàn)時(shí)應(yīng)設(shè)置一個(gè)單一濃度水平的質(zhì)控品即弱陽性對(duì)照。這個(gè)弱陽性對(duì)照值設(shè)定在試劑盒Cut-off值的2~3倍為宜。
3.5 注意事項(xiàng) （1)測(cè)定前，試劑盒從冰箱取出要接近室溫；（2)去除酶標(biāo)板孔內(nèi)的氣泡；（3)洗板要充分；（4)加入樣品稀釋液，待板孔內(nèi)球狀復(fù)合物完全溶解后，再加入樣本、放置溫箱；（5)底物防止金屬離子污染；（6)如血清不能及時(shí)做抗體測(cè)定，1周內(nèi)進(jìn)行檢樣可放于2℃~8℃，時(shí)間較長必須放-20℃保存。
3.6 結(jié)果報(bào)告 結(jié)果陰性：直接報(bào)告陰性。結(jié)果陽性：“出待復(fù)查報(bào)告”不能出陽性報(bào)告，送CDC確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。
4 HIV抗體確診試驗(yàn)
常采用免疫印跡法。我國結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)，HIV抗體陽性，至少有兩條膜帶（gp41/gp120/gp160)或至少有一條膜帶與P24帶同時(shí)出現(xiàn)。
5 HIV抗體檢測(cè)臨床意義
（1)HIV抗體陰性說明：①未感染HIV；②可能感染HIV，但處于窗口期；③疾病晚期，免疫功能缺損的患者。（2)HIV抗體陽性說明：感染HIV。①HIV感染者，感染（WB+) 無癥狀，CD4≥200cells/μl②AIDS患者，感染（WB+) 有癥狀， CD4<200cells/μl。（有癥狀的界定，是按照國家AIDS病例診斷標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的臨床癥狀者)。
【參考文獻(xiàn)】
1 黎志東，徐志凱，楊喬欣.我國HIV分子流行病學(xué)研究現(xiàn)狀.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2001，17（Suppl)：86-87.
2 Lukashov VV,Goudsmit J.Recent evolutionary history of human immunodeficiency virus type 1 B:reconstruction of epidemic onset based on sequence distances to the common ancestor.J MolEvol,2002,54(5):680-691.
作者單位： 655000 云南曲靖，曲靖市第一人民醫(yī)院
