血細(xì)胞分析儀是各級(jí)醫(yī)院臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室血液分析的最常用的設(shè)備之一。準(zhǔn)確一致的檢驗(yàn)結(jié)果是所有檢驗(yàn)活動(dòng)的核心。因此，使用血細(xì)胞分析儀時(shí)，需要進(jìn)行室間、室內(nèi)質(zhì)量控制，通過全血質(zhì)控物來確認(rèn)儀器的各項(xiàng)測(cè)定參數(shù)是否偏倚，以監(jiān)控其測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。
全血質(zhì)控物是一種生物制品試劑，是臨床檢驗(yàn)必備試劑。其目的是監(jiān)測(cè)“儀器→試劑(控制)→樣本→操作者”構(gòu)成的測(cè)定系統(tǒng)存在的誤差，因此，在規(guī)定期限內(nèi)要求全血細(xì)胞十分穩(wěn)定。目前，國內(nèi)生產(chǎn)的全血質(zhì)控物普遍存在血小板、紅細(xì)胞數(shù)目(RBC值)隨時(shí)間變化而降低，白細(xì)胞值往往偏高，直方圖不穩(wěn)定等缺點(diǎn)。使得在實(shí)際應(yīng)用中并不能起到質(zhì)量監(jiān)控與醫(yī).學(xué)全在線監(jiān)測(cè)作用。造成這種現(xiàn)象的原因，是未能選擇恰當(dāng)濃度及最佳醛化條件來有效處理全血細(xì)胞�？梢�，若選用較低濃度醛液對(duì)紅細(xì)胞和白細(xì)胞進(jìn)行醛化固定，則又對(duì)運(yùn)輸過程中造成紅細(xì)胞和白細(xì)胞的損傷不利，更難以延長紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板的有效期。當(dāng)用較高濃度醛液固定紅細(xì)胞和白細(xì)胞時(shí)，雖較穩(wěn)定，但無法被溶血?jiǎng)┤芙猓瑢?duì)血細(xì)胞分析儀的測(cè)量會(huì)造成較大誤差。因此，全血質(zhì)控物各參數(shù)穩(wěn)定性的好壞，取決于微妙的護(hù)膜強(qiáng)度，即對(duì)全血細(xì)胞的醛化程度。針對(duì)上述問題，我們進(jìn)行了全血質(zhì)控物的研制，由于不同比值的醛試劑，其固定紅細(xì)胞、白細(xì)胞及血小板的效果不同，我們通過選用幾種與新鮮血液比例不同的醛試劑，對(duì)新鮮血液進(jìn)行醛化。然后將制備好的全血質(zhì)控物放置于37％條件下保存，每隔一段時(shí)間用血細(xì)胞分析儀測(cè)定各參數(shù)，并將各參數(shù)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，最終選擇出使得各參數(shù)穩(wěn)定時(shí)間最長的濃度比例，作為醛化試劑與新鮮血液的最佳濃度比值，獲得較為滿意的結(jié)果。
1.試劑及材料
1.1 戊二醛，AR級(jí)，上海西寶生物科技有限公司生產(chǎn)產(chǎn)品；
1.2 甲醛，AR級(jí)，廣東汕頭西隴化工廠生產(chǎn)；
1.3 多聚甲醛，AR級(jí)，上海溶劑廠生產(chǎn)；
1.4 PBS緩沖液，PH7.2(現(xiàn)用現(xiàn)配)；
1.5 迭氮鈉，AR級(jí)，浙江城關(guān)化工廠生產(chǎn)；
1.6 氯化鈉，AR級(jí)，廣東汕頭西隴化工廠生產(chǎn)；
1.7 溶血?jiǎng)⑾♂屢�、清洗液均由江西特康科技有限公司提供�?/p>
1.8 氯化鈉，AR級(jí)，廣東汕頭西隴化工廠生產(chǎn)；
1.9 健康人新鮮血液,由江西省血液中心提供。
2.器材及設(shè)備
2.1 10ml小瓶、5ml移液管、錐形瓶；
2.2 DL-5M低速冰凍離心機(jī)，長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司生產(chǎn)；
2.3 TEK-I1血細(xì)胞分析儀，江西特康科技有限公司生產(chǎn)；
3.實(shí)驗(yàn)方法
將從血站買回來的新鮮血液，取出一部分，分成兩份，一份裝于4只滅過菌的瓶中，作為對(duì)照品，用于評(píng)價(jià)醛化固定效果。另一份則用于進(jìn)行以下步驟：
(1)新鮮血液離心10分鐘，用大針管抽出上清液，用預(yù)冷到4℃，pH為6.8-7.2的磷酸鹽緩沖溶液與NaC1、防腐劑混合液洗滌兩次后去上清液。分裝在2O只滅過菌的瓶中，每瓶裝5ml；
(2)用pH6.8-7.2的磷酸鹽緩沖溶液與NaC1混合液、一定量的保養(yǎng)液與醛化固定劑對(duì)配成戊二醛&甲醛&多聚甲醛的醛化固定試劑；
(3)在每3ml血液中，加入不同體積預(yù)冷到4℃的醛試劑，混勻。(見表1)。
(4)醛化后，置于37℃條件下靜置，每間隔一定的時(shí)間置于血液細(xì)胞儀測(cè)試質(zhì)控物中各參數(shù)。以檢測(cè)不同醛化劑對(duì)全血質(zhì)控物的性能的影響。
4.結(jié)果
每間隔一定時(shí)間在TEK—I1血細(xì)胞分析儀上測(cè)試各瓶中全血質(zhì)控物數(shù)值，主要考察WBC、RBC、MCV、HGB、PLT的值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：HGB值一直比較穩(wěn)定。WBC、RBC、MCV值則有不同程度的變化波動(dòng)(見表2、圖1、表3、圖2、表4、圖3)。從表2和圖1可以看出：
0號(hào)瓶作為新鮮血液對(duì)照，每隔一段時(shí)間檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，22小時(shí)后，WBC的值是初始值時(shí)的2倍以上，因此，表明新鮮血液22小時(shí)后，導(dǎo)致變質(zhì)。
1號(hào)瓶中，新鮮血液用等體積的醛化劑處理后，第46小時(shí)后，WBC的值變成初始值的約2.5倍，表明醛液與血液1：1時(shí)，WBC數(shù)值受RBC過分固定而顯著增加。
4.結(jié)果
每間隔一定時(shí)間在TEK—I1血細(xì)胞分析儀上測(cè)試各瓶中全血質(zhì)控物數(shù)值，主要考察WBC、RBC、MCV、HGB、PLT的值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：HGB值一直比較穩(wěn)定。WBC、RBC、MCV值則有不同程度的變化波動(dòng)(見表2、圖1、表3、圖2、表4、圖3)。從表2和圖1可以看出：
0號(hào)瓶作為新鮮血液對(duì)照，每隔一段時(shí)間檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，22小時(shí)后，WBC的值是初始值時(shí)的2倍以上，因此，表明新鮮血液22小時(shí)后，導(dǎo)致變質(zhì)。
1號(hào)瓶中，新鮮血液用等體積的醛化劑處理后，第46小時(shí)后，WBC的值變成初始值的約2.5倍，表明醛液與醫(yī)學(xué)全.在線血液1：1時(shí)，WBC數(shù)值受RBC過分固定而顯著增加。
2號(hào)瓶中，醛化劑與新鮮血液的比值為3：2，第52小時(shí)后，WBC的值開始增大，76小時(shí)已變成初始值的約2．5倍。結(jié)果表明52小時(shí)后，WBC數(shù)值受RBC過分固定而顯著增加。
3號(hào)瓶中，醛化劑與新鮮血液的比值為2：3，第30小時(shí)后，WBC值突然變大而失效。
4號(hào)瓶中，用只有新鮮血液一半體積的醛化劑處理后，46小時(shí)后，WBC的值變成初始值的約2.5倍，故判定此時(shí)試劑的WBC參數(shù)失去質(zhì)控能力。
5號(hào)瓶中，用兩倍于新鮮血液的體積的醛化劑處理后，76小時(shí)后，WBC的值變成初始值的約1．5倍，故判定此時(shí)試劑的WBC參數(shù)失去質(zhì)控能力。
從表3和圖2可以看出：
0號(hào)瓶中的新鮮血液，通過每隔一段時(shí)間檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，到22小時(shí)后，RBC的值開始變小，觀察結(jié)果表明新鮮血液開始逐步發(fā)生溶血現(xiàn)象。
1號(hào)瓶中，新鮮血液用等體積的醛化劑處理后，第46小時(shí)后，RBC的值開始明顯變小，可見溶血現(xiàn)象。2號(hào)瓶中，醛化劑與新鮮血液的比值為3：2，到76小時(shí)后，RBC的值開始明顯變小，可見溶血現(xiàn)象。
3號(hào)瓶中，醛化劑與新鮮血液的比值為2：3，第46小時(shí)后，RBC的值開始明顯變小，并見到血塊，取全血細(xì)胞進(jìn)行鏡檢，看見極少量紅細(xì)胞，故判定此時(shí)紅細(xì)胞大部分被溶解。
4號(hào)瓶中，用只有新鮮血液一半體積的醛化劑處理后，第30小時(shí)后，RBC的值開始明顯變小，可見溶血現(xiàn)象。
5號(hào)瓶中，用兩倍于新鮮血液的體積的醛化劑處理后，到92小時(shí)時(shí)RBC的值仍然較穩(wěn)定。
從表4和圖3可以看出：
0號(hào)瓶中的新鮮血液，通過每隔一段時(shí)問檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，第22小時(shí)后，MCV的值開始變小，表明新鮮血液中紅細(xì)胞形態(tài)開始皺縮。
1號(hào)瓶中，新鮮血液用等體積的醛化劑處理后，第30小時(shí)后，MCV的值開始變大，到52小時(shí)后，MCV的值又開始變小，故第30小時(shí)后MCV參數(shù)不穩(wěn)定。
2號(hào)瓶中，醛化劑與新鮮血液的比值為3：2，第92小時(shí)后，MCV的值開始變小，結(jié)果表明新鮮血液中紅細(xì)胞形態(tài)開始皺縮，故MCV參數(shù)值不穩(wěn)定。
3號(hào)瓶中，醛化劑與新鮮血液的比值為2：3，第76小時(shí)后，MCV的值開始變小，表明新鮮血液中紅細(xì)胞形態(tài)開始皺縮，導(dǎo)致MCV參數(shù)值不穩(wěn)定。
4號(hào)瓶中，用只有新鮮血液一半體積的醛化劑處理后，第46小時(shí)后，MCV的值開始變小，表明新鮮血液中紅細(xì)胞形態(tài)開始皺縮，導(dǎo)致MCV參數(shù)值不穩(wěn)定。
5號(hào)瓶中，用兩倍于新鮮血液的體積的醛化劑處理后，到76小時(shí)后，MCV的值變大，第92小時(shí)后，MCV的值開始變小，結(jié)果表明76sJ,H~后MCV參數(shù)值不穩(wěn)定。
本次實(shí)驗(yàn)未能顯示PLT的結(jié)果實(shí)驗(yàn)測(cè)試參數(shù)。相關(guān)資料表明血小板可以采用乳膠顆粒代替。我們?cè)噲D將血小板單獨(dú)進(jìn)行醛化固定，且其醛化過程非常簡單。故在整個(gè)研究過程中，暫時(shí)忽略對(duì)血小板的研究。
5.結(jié)果分析與結(jié)論
根據(jù)庫爾特工作原理，標(biāo)本被稀釋后分別進(jìn)入白細(xì)胞和紅細(xì)胞(包括血小板)分析測(cè)量通道內(nèi)，進(jìn)行各項(xiàng)參數(shù)測(cè)量。紅細(xì)胞和血小板測(cè)量通道，根據(jù)細(xì)胞體積大小的不同以及數(shù)量級(jí)的差異，可直接測(cè)得紅細(xì)胞及血小板的數(shù)量。白細(xì)胞測(cè)量通道中則需在稀釋懸液中加入溶血?jiǎng)�，將紅細(xì)胞溶解，然后測(cè)定白細(xì)胞與血紅蛋白量。同時(shí)，溶血?jiǎng)┦拱准?xì)胞的形態(tài)發(fā)生變化，從而，區(qū)別出白細(xì)胞的種類，達(dá)到二分群、三分群的目的。所以，用與新鮮血液濃度比值不同的戊二醛、甲醛、多聚甲醛混合溶液，其醛化效果不同，會(huì)出現(xiàn)不同的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象：若醛化劑與新鮮血液的比值較低，醛化程度不夠，在
37 條件下紅細(xì)胞易發(fā)生溶血或者紅細(xì)胞形態(tài)改變(見表3、4)
現(xiàn)象，在很短的時(shí)問內(nèi)，出現(xiàn)紅細(xì)胞數(shù)量(RBC)減少，白細(xì)胞(WBC)或血小板數(shù)量增多，紅細(xì)胞比積減小，紅細(xì)胞體積(MCV)減小，游離血紅蛋白濃度增多等現(xiàn)象。若醛化劑與醫(yī)學(xué)招聘新鮮血液的比值較高，醛化程度過強(qiáng)，則在短期內(nèi)，使得白細(xì)胞(WBC)或血小板數(shù)目增多(此為紅細(xì)胞被溶血?jiǎng)?/p>
溶解后，細(xì)胞膜碎片較大，使得測(cè)量參數(shù)出現(xiàn)誤差)，儀器甚至出現(xiàn)堵孔現(xiàn)象。影響儀器對(duì)白細(xì)胞(見表2)和血小板的測(cè)定準(zhǔn)確度。
從實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象我們可以得出，當(dāng)我們選用時(shí)，雖然醛化劑與新鮮血液的比值為2：1的5號(hào)樣品中，MCV值在約76小時(shí)后變大、92小時(shí)后變小，不如醛化劑與新鮮血液的比值為3：2的2號(hào)樣品的MCV值穩(wěn)定。但是，5號(hào)樣品的WBC值和RBC值穩(wěn)定時(shí)間相對(duì)最長。并且，出現(xiàn)紅細(xì)胞體積(McV)變大的現(xiàn)象，作者推斷是質(zhì)控物中的環(huán)境滲透壓發(fā)生變化導(dǎo)致紅細(xì)胞膨脹，使得MCV值變大，故可通過維持環(huán)境滲透壓來改善這種情況的發(fā)生。此外，本次研究中還發(fā)現(xiàn)，醛化混合溶液中，戊二醛、甲醛、多聚甲醛比例不同時(shí)，全血質(zhì)控物的色澤有明顯的不同：多聚甲醛比值越大，質(zhì)控物色澤越接近紅色。戊二醛所占比值越大，則質(zhì)控物色澤越偏棕色；最終，我們選用了使全血質(zhì)控物呈紅色的濃度比值，使其色澤與新鮮血液類似。綜上所述各項(xiàng)結(jié)果及對(duì)結(jié)果的分析，可以發(fā)現(xiàn)，醛化試劑與新鮮血液使用比例為2：1時(shí)，全血質(zhì)控物的性能保持狀況最好。
