十七、腎上腺自身抗體的檢測
抗腎上腺自身抗體是對(duì)腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞漿成分的一種器官特異性抗體。主要見于慢性腎上腺皮質(zhì)功能減退癥（阿狄森氏病)病人。用間接免疫熒光法檢測，陽性率約50%，其他自身免疫病陽性率2%～5%。
1．抗原切片抗原用新鮮腎上腺尸檢或手術(shù)切除標(biāo)本，常用皮質(zhì)醇增多癥（柯興氏病)病人手術(shù)切除的腎上腺�；蛉『锬I上腺組織，作冰凍切片。不需固定。
2．間接免疫熒光檢查方法
3．熒光顯微鏡檢查可見特異性熒光在皮髓質(zhì)連接區(qū)最清晰，定位于皮質(zhì)網(wǎng)狀帶細(xì)胞胞漿，髓質(zhì)細(xì)胞不與抗體反應(yīng)。
十八、類風(fēng)濕因子（Rheumatoid factor)的檢測
類風(fēng)濕因子是一種抗輕度變性的IgG的自身抗體，可與人或動(dòng)物的熱聚合IgG或抗原結(jié)合的IgG（即免疫復(fù)合物中的IgG)反應(yīng)，而不與正常IgG反應(yīng)。類風(fēng)濕因子為IgM類抗體。主要見于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎產(chǎn)現(xiàn)人血清和組織中。
1．直接法
�。�1)用病人關(guān)節(jié) 滑膜或淋巴結(jié)，冰凍切片，冷丙酮固定10min。
（2)標(biāo)記變性IgG或球蛋白：取人血清提取的γ球蛋白（20～25mg/ml)，按常規(guī)法標(biāo)記FITC，去游離熒光素后，將標(biāo)記溶液置63℃水浴加熱10min，使γ球蛋白熱變性。加入40%2.17mol/L硫酸鈉使熱聚合體沉淀，置冰箱4h（4℃)，然后在低溫下離心30min（10000rpm)。取沉淀以預(yù)冷至4℃的蒸餾水溶解至原體積半量。用蒸餾水透析24h（4～6℃)，再用pH7.6生理鹽水透析24h。高速離心（12000rpm)30min除去不溶性聚合物，取上清分裝，-20℃保存?zhèn)溆谩?/P>
�。�3)直接免疫熒光染色：切片分別用以下染色試劑處理
�、偌訕�(biāo)記變性γ球蛋白溶解。
�、诩訕�(biāo)記抗IgM或γ球蛋白熒光抗體。
③加未標(biāo)記變性γ球蛋白，作用切片后，洗滌，再加標(biāo)記變性γ球蛋白。
①，②在適當(dāng)稀釋的試劑染色后呈特異性熒光，大多數(shù)活動(dòng)性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎，可見陽性熒光的漿細(xì)胞堆集。③陰性或熒光顯著減弱。
2．間接法用以檢出病人血清中的類風(fēng)濕因子。
抗原：用溶血素致敏的綿羊血細(xì)胞涂片。丙酮固定10min。
常規(guī)間接法染色。病人血清中有類風(fēng)濕因子，與綿羊紅細(xì)胞上的溶血素（變性IgG)結(jié)合，再加入γ球蛋白熒光抗體，與類風(fēng)濕因子結(jié)合。因而紅細(xì)胞呈現(xiàn)亮明的熒光，即證明類風(fēng)濕因子陽性。
十九、抗中性白細(xì)胞胞漿自身抗體（Anti－eutrophil cytoplasmic autoantibody ANCA)
Davies 等（1982)首次報(bào)告在壞死性腎小球腎炎患者血清中發(fā)現(xiàn)ANCA。Hall等（1984)在4例系統(tǒng)性血管炎中也發(fā)現(xiàn)ANCA，其中3例表現(xiàn)為壞死性腎小球腎炎。Vander woude等（1985)報(bào)告血清中ANCA的滴度與診斷活動(dòng)性Wegener氏肉芽腫的病情有密切關(guān)系，隨著病情緩解，ANCA的滴度逐漸降低，所以認(rèn)為是診斷Wegener氏肉芽腫很敏感的指標(biāo)。隨后一些研究表明檢查ANCA對(duì)診斷結(jié)節(jié) 性多動(dòng)脈炎和特發(fā)性新月體腎炎均有較高的敏感性。1989年和1990年分別召開了第一和第二屆國際ANCA專題研討會(huì)，引起了國際上的廣泛重視。
ANCA抗原存在于中性白細(xì)胞的胞漿顆粒中，分子量為29kD，已證實(shí)是一種絲氨酸蛋白酶，與存在于中性白細(xì)胞嗜天青色顆粒中的絲氨酸蛋白酶-蛋白酶3（PR3)十分相似。所以，胞漿型ANCA（C-ANCA)能與PR3發(fā)生特異性反應(yīng)。另一型稱核周型ANCA（P-ANCA)的主要抗原成分是髓過氧化物酶（MPO)，在壞死性腎小球腎炎和系統(tǒng)性血管炎患者，約90%的P-ANCA能與MPO發(fā)生特異性反應(yīng)。由于有時(shí)P-ANCA同時(shí)伴有細(xì)胞核熒光，為排除假陽性，必須證明是MPO-ANCA。ANCA可以為IgG、IgM、或IgA類抗體，在不同疾病時(shí)三者的出現(xiàn)機(jī)率不同。
間接免疫熒光檢查ANCA：用肝素抗凝血分離中性白細(xì)胞，以0.01mol/l Ph7.4 PBS洗細(xì)胞3次，制涂片，吹干。無水酒精固定5min。加待測血清，37℃孵育40min，PBS沖洗。加1：10稀釋的抗人IgG-FITC熒光抗體，37℃孵育30min，PBS洗3次，每次3min，磷酸緩沖淮甘油封片。熒光顯微鏡觀察。
ANCA的熒光可表現(xiàn)為C-ANCA和P-ANCA二種類型：C-ANCA熒光在胞漿中，分葉核之間有強(qiáng)的彌散性熒光、核無熒光。P-ANCA的熒光集中核周圍，形成環(huán)狀或不規(guī)則塊狀。
ANCA的致病機(jī)理：ANCA能使中性白細(xì)胞活化，發(fā)生呼吸爆炸，釋放胞漿中的多種水解酶，氧自由基等活性物質(zhì)而導(dǎo)致組織損傷。由于PR3和MPO都帶正電荷，它們能與腎小球基底膜結(jié)合，PR3-ANCA和MPO-ANCA與之發(fā)生免疫反應(yīng)導(dǎo)致腎小球基底膜損傷，另外，沉積在基底膜上的PR3和MPO還能通過介導(dǎo)細(xì)胞免疫，參予腎組織損傷。
二十、增殖細(xì)胞核抗原抗體（Proliferative cell nuclear antigen antibody, PCNA)
培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)促細(xì)胞分裂劑刺激，核內(nèi)DNA開始合成G0期，到最大增殖期（S期)，細(xì)胞核特異的出現(xiàn)DNA的復(fù)制，利用這一特點(diǎn)，制成抗原DNA聚合酶S的輔助蛋白。取培養(yǎng)細(xì)胞或人末稍血淋巴細(xì)胞經(jīng)PHA，ConA刺激后涂片，間接免疫熒光檢測。結(jié)果可PHA刺激后48hDNA合成開始的S期出現(xiàn)很強(qiáng)的斑點(diǎn)型熒光，（G)期細(xì)胞無反應(yīng)。
在SLE病人血清中出現(xiàn)有特異性診斷價(jià)值，出現(xiàn)率為3%～5%。
二十一、抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié) 炎相關(guān)核抗原的抗體（Antirheu－matoid arthritis associated nuclear antigen antibody, RANA)
又稱SSC抗體，RAP，可有免疫熒光間接法檢測，用人二倍體B細(xì)胞（Wil-2)或Raji細(xì)胞為抗原片，細(xì)胞滴片吹干，37℃干燥固定，因丙酮，乙醇等可使RANA失活。熒光陽性呈核內(nèi)斑點(diǎn)型。對(duì)診斷類內(nèi)濕關(guān)節(jié) 炎和伴有口眼干燥綜合征的病人有參考意義。近年發(fā)現(xiàn)其他結(jié)締組織病和正常人出率也很高，其特異性尚待進(jìn)行深入研究。醫(yī).學(xué).全.在線.網(wǎng).站.提供
二十二、抗精子抗體（Anti-sperm antibody, ASA)
在正常情況下由血睪屏障將精子抗原與免疫系統(tǒng)隔離，當(dāng)此屏障發(fā)生破壞，精子抗原通過副睪間隙組織的淋巴管或毛細(xì)血管而進(jìn)入免疫系統(tǒng)，就會(huì)引起自身免疫反應(yīng)，產(chǎn)生自身抗體。抗精子抗體也可在一些女性體內(nèi)產(chǎn)生。男性不孕癥患者血中可檢出很高陽性率的ASA。女性不孕癥也可因ASA引起精子運(yùn)動(dòng)障礙，導(dǎo)致不孕。
抗精子抗體的作用是：①ASA可使精子運(yùn)動(dòng)障礙不能通過子宮頸管；②精子頂體酶活性被ASA抑制，使精子不易穿透包繞卵細(xì)胞的卵丘，放射冠和透明帶；③抑制了精子與卵細(xì)胞膜的融合；④導(dǎo)致胚胎死亡和流產(chǎn)。⑤ASA的作用可使精子發(fā)生凝集，制動(dòng)和結(jié)合三類。凝集抗體有精子頭對(duì)頭，尾對(duì)尾及混合型三種。
熒光抗體法和固相酶染色法常用于檢測抗精子抗體。
固相酶免疫細(xì)胞化學(xué)方法：液化新鮮精液離心棄上清，沉積的精子用PBS洗3次，加0.5ml小牛血清混勻，校正精子濃度為5×107ml，涂于載玻片上，室溫自然干燥，甲醇固定10min，PBS洗2次，吹干，加被檢血清，37℃濕盒，30min，PBS洗3次，每次3min，加酶標(biāo)記抗人IgG抗體，免疫熒光法則加抗人熒光抗體，37。C濕盒30min，PBS洗3次，每次3min（或熒光顯微鏡檢查)，用DAB-H2O2顯色（同前述免疫酶細(xì)胞化學(xué)方法)。常規(guī)脫水、透明樹膠封固。油鏡觀察結(jié)果。陽性反應(yīng)精子呈棕黃色，陰性蘭色（用伊文思藍(lán)復(fù)染)。陽性可見在精子頂體、中體，后核帽、中片、尾及尾尖等。
二十三、其他自身抗體的檢測
目前已發(fā)揮許多自身抗體，如抗膽小管抗體，見于原發(fā)性膽汁性肝硬化病人，陽性率達(dá)75%。用大白鼠肝的膽小管作抗原，間接免疫熒光染色陽性熒光定位于膽小管上皮細(xì)胞，呈均勻熒光。抗生殖細(xì)胞的自身抗體除精子外還有卵巢細(xì)胞抗體，常見不孕癥患者。
心肌抗體常見于心臟手術(shù)后綜合癥和心臟移植的受體。
結(jié)腸粘膜抗體可見于潰瘍性結(jié)腸炎患者的血清中，還有抗網(wǎng)織纖維抗體等。
近年對(duì)垂體細(xì)胞自身抗體研究發(fā)現(xiàn)，在多內(nèi)分泌自身免疫疾病中存在抗促乳素細(xì)胞抗體，生長激素細(xì)胞抗體，ACTH細(xì)胞抗體等。
在神經(jīng)系統(tǒng)中抗神經(jīng)髓鞘成分的自身抗體，常見于神經(jīng)脫鞘性疾病。
在一些眼科疾病中存在的自身抗體如抗晶體成分抗體，抗眼肌抗體等。
用大白鼠組織作抗原檢查自身抗體，在心肌間質(zhì)，肝枯否氏細(xì)胞，平滑肌和橫紋肌模，胃及腎、肝的間質(zhì)，腎小管近曲管刷狀緣等出現(xiàn)陽性熒光，這是所謂異嗜性抗體（Heterophile anti－body)，它和自身抗體易發(fā)生混淆，必須注意區(qū)分。
免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)在自身免疫性疾病診斷中以免疫熒光技術(shù)應(yīng)用最廣泛，但應(yīng)用免疫酶技術(shù)和免疫金-銀技術(shù)也可以取得良好結(jié)果，作用用葡萄菌A蛋白的辣根過氧化物酶標(biāo)記物代替熒光抗體作自身抗體檢測，所得到的結(jié)果可用光學(xué)顯微鏡檢查，適于在沒有熒光顯微鏡的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。
