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中國生物制品規(guī)程:舊結(jié)核菌素制造及檢定規(guī)程

本品系用結(jié)核菌的液體培養(yǎng)物,經(jīng)殺菌后除去菌體,加溫濃縮制成的粘性液體,含有結(jié)核菌的新陳代謝產(chǎn)物,對已受結(jié)核菌感染或曾接受卡介苗免疫的相體,能引起特異的變態(tài)反應。用以檢查是否已受結(jié)核菌的感染及觀察免疫反應。1 菌種1.1 由中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同…

本品系用結(jié)核菌的液體培養(yǎng)物,經(jīng)殺菌后除去菌體,加溫濃縮制成的粘性液體,含有結(jié)核菌的新陳代謝產(chǎn)物,對已受結(jié)核菌感染或曾接受卡介苗免疫的相體,能引起特異的變態(tài)反應。用以檢查是否已受結(jié)核菌的感染及觀察免疫反應。

1 菌種

1.1 由中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同意。

1.2 制造舊結(jié)核菌素的菌種為人型結(jié)核菌。

1.3 菌種可凍干保存,亦可保存于駱(Lowenstein)氏培養(yǎng)基上,每3~6個月傳代一次。

2 制造

2.1 啟開菌種接種于駱氏培養(yǎng)基,置37℃培養(yǎng)2~3周,然后移種在蘇通綜合培養(yǎng)基或其他適宜培養(yǎng)基上,于27℃表面培育2~3周,再在甘油肉湯或蘇通培養(yǎng)基上移種1~2代供大量接種之用。

2.2 接種

用接種環(huán)挑取一塊生長良好的菌膜,輕輕移種于5%(ml/ml)甘油肉湯或其他適宜培養(yǎng)基的表面,菌膜應不下沉。

接種后37℃培育8~10周,要避免振動以免菌膜下沉。培育3周左右如培養(yǎng)瓶中菌膜未鋪滿表面,或培養(yǎng)期間有污染者應廢棄。

2.3 殺菌

高壓蒸汽121℃30分鐘,或100℃流動蒸汽加熱1小時。

2.4 殺菌后用無菌絨布或濾紙過濾除去菌體。

2.5 濃縮

濾液置蒸發(fā)皿中于75~80℃水浴上加溫蒸發(fā)。應在通風柜內(nèi)進行,并不時攪拌(亦可用其他方法)。濃縮至約為原量的1/10。

2.4 殺菌后用無菌絨布或濾紙過濾除去菌體。

2.5 濃縮

濾液置蒸發(fā)皿中于75~80℃水浴上加溫蒸發(fā)。應在通風柜內(nèi)進行,并不時攪拌(亦可用其他方法)。濃縮至約為原量的1/10。

2.5.1 濃縮后取樣少許,進行效價測定(參見2.7.4項)。如效價較標準舊結(jié)核菌素為低,應再適jfsoft.net.cn/job/當濃縮,如較標準為高,可加入適量滅菌蒸餾水或50%(ml/ml)甘油,再重新抽樣測定效價,直至合格。然后,加入0.25%~0.5%(g/ml)苯酚或其他適宜防腐劑。

2.5.2 不同菌株生產(chǎn)的舊結(jié)核菌素可混合后進行濃縮,亦可分別濃縮,效價測定合格后混合。

2.5.3 濃縮后的舊結(jié)核菌素應放2~8℃最少1個月,使不溶解的物質(zhì)析出并除去(如用離心沉淀法)。然后除菌處理,并做無菌試驗。

2.6 分批

同日殺菌的舊結(jié)核菌素作為1批, 同時有數(shù)瓶者,按瓶分為亞批。

2.7 半成品檢定

2.7.1 物理檢查

舊結(jié)核菌素為深棕色澄明液體,不應含渣粒、沉淀物或其他雜質(zhì),并有特殊的氣味。

2.7.2 無菌試驗

按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。

2.7.3 安全試驗

用體重300~400g的健康豚鼠2只,每只腹腔注射1.0ml,觀察6周,豚鼠應活存。到期解剖,肉眼觀察應夫任何進行性結(jié)核病變。如在觀察期間豚鼠死亡,以加倍量動物進行復試。

2.7.4 效價測定

標準舊結(jié)核菌素由中國藥品生物制品檢定所發(fā)給。

2.7.4.1 動物試驗

將標準及待檢結(jié)核菌素分別稀釋成1:1000、1:500、1:100等3個稀釋度,用體重400~600g已致敏的白色豚鼠最少4只,去毛后于背部脊柱兩側(cè)相對部位分別皮內(nèi)注射上述稀釋度的舊結(jié)核菌素各0.1ml(從尾側(cè)起先注射稀釋度高者)。于注射后24、48、72小時各觀察結(jié)果一次(亦可根據(jù)48小時的反應),算出待檢和標準舊結(jié)核菌素的反應面積總和之比即為反應總面積比。同樣也可求出標準舊結(jié)核菌素的平均反應)。比值1±0.1者為合格。

2.7.4.2 人體反應測定

動物試驗合格后做人體反應測定,選擇對舊結(jié)核菌素1個單位反應陽性的敏感成人最少4人,每人于兩前臂內(nèi)側(cè)皮內(nèi)相對部位分別注射10單位、5單位、2.5單位的標準及待檢舊結(jié)核菌素各0.1ml,注射生24、48及72小時觀察結(jié)果,并求出其比值(計算方法與2.7.4.1項相同)。不同濃度亦可不在同一人身上注射,但人數(shù)要增加,每個稀釋度最少4人。

2.8 分裝

物理檢查、無菌試驗、安全試驗及效價測定合格后即可分裝,分裝后抽樣做成品檢定。

3 成品檢定

包括物理檢查、無菌試驗、安全試驗等,試驗方法見2.7項。

4 保存與效期

保存于2~8℃暗處。自檢定合格之日起效期為5年。

5 稀釋舊結(jié)核菌素

5.1 稀釋用的舊結(jié)核菌素應為經(jīng)檢定合格并未過效期者。

5.2 可用含有0.25%~0.5%(g/ml)苯酚或其他適宜防腐劑的生理鹽水或緩沖生理鹽水稀釋,使每ml含50單位。

5.3 稀釋舊結(jié)核菌素應進行無菌試驗。防腐劑試驗:用體重18~20g之健康小白鼠2只,每只皮下注射稀釋舊結(jié)核菌素0.5ml。用苯酚作防腐劑量,小白鼠會出現(xiàn)戰(zhàn)粟癥狀,但不應超過半小時,觀察7天,不得有局部膿腫或死亡。

5.4 稀釋舊結(jié)核菌素效期自檢定合格之日起為42天。保jfsoft.net.cn/Article/存于2~8℃暗處。

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