一、移植物選擇標(biāo)準(zhǔn)
移植物選擇是移植能否成功的關(guān)鍵因素之一，選擇的標(biāo)準(zhǔn)可歸納為以下幾類：
1．一般情況①移植物本身必須是健康細(xì)胞、組織或器官，在形態(tài)和功能上都沒(méi)有異常發(fā)現(xiàn)；②供者無(wú)傳染�。ㄓ绕涫�艾滋病和肝炎等)或相關(guān)感染、無(wú)代謝病和惡性腫瘤（原發(fā)性腦腫瘤除外)，全身重要器官的功能正常；③供者與受者的年齡應(yīng)相仿，尤其供者應(yīng)小于受者；但在生命器官移植時(shí)，供者年齡最好在10～50歲之間；④供者器官與受區(qū)的大小應(yīng)相接近，尤在心、肝、肺等原位移植中，供者與受者體重相差不能過(guò)于懸殊，否則就植入困難或者不適應(yīng)。
2．ABO血型相容一般臨床輸血的ABO選配原則也適用于移植，O型受者只接受O型移植物；A型受者接受A型或O型；B型受者接受B型或O型；AB型受者接受范圍較廣。一般情況下，不管是活體移植物還是尸體移植物，血型不相容就不應(yīng)該進(jìn)行移植。
3．HLA相容性供者與受者之間HLA相同的位點(diǎn)越多，相容性就越好，長(zhǎng)期存活的可能性就越大。但是臨床移植的絕大多數(shù)是同種移植，在非直系血緣關(guān)系的人群中，幾乎不可能發(fā)現(xiàn)HLA完全相同者；只要能發(fā)現(xiàn)1～2個(gè)HLA位點(diǎn)相同，就比HLA完全不相同者之間的www.med126.com移植成功率大得多。如果有可能，移植物的供者最好是近親（例如父母、子女或同胞兄弟姊妹等)的健康志愿者，這樣可以在移植前對(duì)雙方較全面的檢測(cè)和交叉配合試驗(yàn)，還可能有選擇的余地。如果等待尸體器官，檢測(cè)HLA的困難性增加，選擇的機(jī)會(huì)也少。移植中心的建立可以解決好多難題。
二、HLA血清學(xué)定型試驗(yàn)
HLA-A、B、C、DR或DQ位點(diǎn)的抗原可用血清方法進(jìn)行檢測(cè)，所以稱為SD抗原（serologicallydefinedantigen)，其檢測(cè)方法目前普遍采用補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒（complementdependentcytotoxicyty，CDC)試驗(yàn)。
1．試驗(yàn)方法美國(guó)國(guó)家衛(wèi)生研究院（NIH)的標(biāo)準(zhǔn)方法如下：將一系列已知特異性的標(biāo)準(zhǔn)分型血清（1μl/孔)按設(shè)計(jì)好的方案加到72孔或60孔專用反應(yīng)板中（如暫時(shí)不用可以冰凍保存)；加入待檢淋巴細(xì)胞2000個(gè)/1μl/孔，置室溫30min讓抗體與抗原結(jié)合；加入補(bǔ)體（多為家兔混合血清)5μl，置室溫60min；每孔加入5％伊紅2～3μl，使死細(xì)胞著色；3～5min后每孔加12％福爾馬林8μl固定細(xì)胞；待細(xì)胞全部沉淀后用相差顯微鏡或倒置顯微鏡觀察結(jié)果。某孔的著色細(xì)胞超過(guò)50個(gè)即為陽(yáng)性反應(yīng)，說(shuō)明被檢細(xì)胞的HLA型與該孔所加抗體的相一致；否則為不一致。
2．細(xì)胞分離檢測(cè)活體可取外周血直接分離；檢測(cè)尸體時(shí)取淋巴結(jié)，制成單個(gè)細(xì)胞并洗滌后再分離。檢測(cè)HLAⅠ類抗原時(shí)取單個(gè)核細(xì)胞層的細(xì)胞即可應(yīng)用，因?yàn)樵搶蛹?xì)胞都表達(dá)Ⅰ類抗原；但檢測(cè)HLA-DR和DQ等Ⅱ類抗原時(shí)，就需要進(jìn)一步分離較純的B細(xì)胞（純度達(dá)80％以上)，因?yàn)棰蝾惪乖环植荚赥細(xì)胞上。
3．分型血清試驗(yàn)用的標(biāo)準(zhǔn)抗血清必須從經(jīng)產(chǎn)婦（尤其多產(chǎn)婦)的血清中篩選，胎盤(pán)液或其他體液也可應(yīng)用；也可通過(guò)人工免疫獻(xiàn)血員的方法得到。篩選的方法也用CDC試驗(yàn)，只是將已知與待檢互換。Ⅱ類抗血清篩選后還必須用混合血小板將其中可能含有的Ⅰ類抗體吸收去，因試驗(yàn)用的B細(xì)胞上也有Ⅰ類抗原。許多人嘗試過(guò)抗HLA的單克隆抗體，但是多不成功，因鼠源性抗體主要是針對(duì)人類的公共抗原而非某個(gè)體的HLA私有抗原；還有一個(gè)原因是鼠源性抗體多不能固定補(bǔ)體，不能用細(xì)胞毒方法進(jìn)行檢測(cè)。
4．HLA定型板某些專門(mén)實(shí)驗(yàn)室將HLA定型血清預(yù)先加到專用的反應(yīng)板上冰凍保存，可供自己或出售給他人使用，試驗(yàn)時(shí)只須加入待檢細(xì)胞及其它試劑即可。定型板中抗血清的種類要覆蓋本民族或本地區(qū)80％以上的抗原，其中高頻抗原每種抗血清3份以上，低頻抗原每種抗血清2份以上。定型血清板須經(jīng)幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可或有關(guān)部門(mén)核準(zhǔn)后才能銷售和使用；現(xiàn)在國(guó)內(nèi)所做的定型板多限于HLAⅠ類抗原的檢測(cè)。
三、HLA細(xì)胞法分型試驗(yàn)
HLA-D和DP位點(diǎn)的抗原須用細(xì)胞法分型進(jìn)行鑒定，所以又稱LD抗原（lymphocytedefinedantigen)，其鑒定方法普遍采用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（mixedlymphocyteculture，MLC)，也稱混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（mixedlymphocytereaction，MLR)。
1．試驗(yàn)方法將分離的反應(yīng)細(xì)胞（通常是患者的淋巴細(xì)胞)與刺激細(xì)胞（通常是供者或已知的標(biāo)準(zhǔn)淋巴細(xì)胞)配制成1×106/ml濃度jfsoft.net.cn/Article/的懸液，各加0.2ml到反應(yīng)管中；放置37℃和5％CO2環(huán)境下培養(yǎng)5～6天。培養(yǎng)結(jié)束后進(jìn)行涂片染色，觀察并計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞；也可在培養(yǎng)結(jié)束前5～12小時(shí)加入3H-TdR，收獲后用液體閃爍儀計(jì)數(shù)細(xì)胞的放射性。試驗(yàn)結(jié)果的常用表示方式是刺激指數(shù)（SI)。
MLC分為雙向法和單向法。雙向MLC是反應(yīng)管中兩種細(xì)胞都有應(yīng)答能力，可以互為刺激細(xì)胞和反應(yīng)細(xì)胞，試驗(yàn)結(jié)果是兩種細(xì)胞反應(yīng)之和。
SI＝2×試驗(yàn)管cpm/（A對(duì)照cpm＋B對(duì)照cpm)
雙向MLC只能反映兩種細(xì)胞間LD的差別，結(jié)果比較模糊，也不能做LD抗原的分型。單向MLC是將刺激細(xì)胞用絲裂霉素C（mitomycinC)或X線照射先行滅活，但細(xì)胞的抗原性保持不變，因此可作為刺激細(xì)胞而不能作為反應(yīng)細(xì)胞，試驗(yàn)結(jié)果是待檢測(cè)細(xì)胞的反應(yīng)，使于結(jié)果分析。
SI＝試驗(yàn)管cpm/自身對(duì)照cpm
單向MLC可以用來(lái)進(jìn)行HLD-D和DP位點(diǎn)的分型試驗(yàn)，常用的方法有兩類：純合子分型細(xì)胞（homozygoustypingcell，HTC)試驗(yàn)和預(yù)敏淋巴細(xì)胞分型（primedlymphocytetyping，PLT)試驗(yàn)。
2．HTC試驗(yàn)HTC是指細(xì)胞內(nèi)一對(duì)同源染色體上兩個(gè)HLA單倍型完全相同，所以該位點(diǎn)在細(xì)胞表面只表達(dá)一種抗原；HTC可從近親婚配的子代表中尋找。將一組HTC經(jīng)處理來(lái)活后作為刺激細(xì)胞，與待檢細(xì)胞做單向MLC。如果待檢細(xì)胞與刺激細(xì)胞的LD不同，就會(huì)發(fā)生反應(yīng)；如果相同便不反應(yīng)；所以試驗(yàn)又稱為陰性分型法。當(dāng)SI≤2時(shí)可認(rèn)為待檢細(xì)胞與該管HTC的LD抗原相同。本法的缺點(diǎn)是HTC難以得到，而且培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)（5～6天)，在尸體器官移植時(shí)不能應(yīng)用。
3．PLT試驗(yàn)本方法需事先準(zhǔn)備分型細(xì)胞：選擇只有一個(gè)單倍型相同的兩個(gè)體a/b和a/c（這在雙親與子女之間不難做到)，取前者的淋巴細(xì)胞處理后作刺激細(xì)胞，取后者的淋巴細(xì)胞作反應(yīng)細(xì)胞；將兩者進(jìn)行單向混合培養(yǎng)，至第10天使可得到針對(duì)b單倍型有特異性免疫應(yīng)答能力的預(yù)致敏分型細(xì)胞（PTL)。依此類推，可以制備出一系列能識(shí)別各種已知LD抗原的一套PTL；這些處于休止?fàn)顟B(tài)的致敏記憶細(xì)胞可在液氮中長(zhǎng)期保存?zhèn)溆谩?/p>
進(jìn)行PLT試驗(yàn)時(shí)，需將待檢淋巴細(xì)胞處理成刺激細(xì)胞，而PTL為反應(yīng)細(xì)胞；如果待檢細(xì)胞的LD抗原與PTL預(yù)先識(shí)別的特異性相同，則PTL會(huì)迅速出現(xiàn)反應(yīng)（二次應(yīng)答)，如不同則不出現(xiàn)快速反應(yīng)，所以本法又稱為陽(yáng)性分型法。PLT法克服了HTC法試驗(yàn)周期長(zhǎng)的缺點(diǎn)，在24小時(shí)內(nèi)即可報(bào)出結(jié)果；PTL比HTC容易得到，但真正做起來(lái)也復(fù)雜。
不管是CDC試驗(yàn)還是MIC方法，都必須以受檢者的淋巴細(xì)胞作為檢測(cè)標(biāo)本，這就大大地限制了檢測(cè)方法的應(yīng)用范圍；而且還存在抗體來(lái)源困難、細(xì)胞培養(yǎng)周期過(guò)長(zhǎng)等缺點(diǎn)；所以近年來(lái)將分子生物學(xué)技術(shù)引入了HLA檢測(cè)的領(lǐng)域，產(chǎn)生了DNA分型法。DNA分型法是利用PCR技術(shù)將標(biāo)本中的少量目的DNA大量擴(kuò)增，然后再進(jìn)行產(chǎn)物鑒定的方法（原理和步驟在此不予討論)，特點(diǎn)是靈敏度高，試劑來(lái)源容易，應(yīng)用范圍廣，陳舊的或微量的標(biāo)本都可進(jìn)行檢測(cè)，在移植醫(yī)學(xué)、法醫(yī)學(xué)和其他方面都有廣闊的前途。
四、交叉配合試驗(yàn)
傳統(tǒng)的交叉配合（crossmatching)試驗(yàn)是檢測(cè)受者體內(nèi)是否存在抗供者的特異性抗體，現(xiàn)在可同時(shí)檢測(cè)受者對(duì)供者LD抗原的相容程度。不管是否已經(jīng)進(jìn)行過(guò)各種HLA分型試驗(yàn)，交叉配合試驗(yàn)對(duì)選擇移植物都有一定的參考價(jià)值。
1．微量細(xì)胞毒試驗(yàn)用供者的淋巴細(xì)胞作靶細(xì)胞，與受者的血清進(jìn)行CDC；出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)說(shuō)明受者體內(nèi)含有抗供者的特異性抗體，移植后很有可能發(fā)生超急排斥反應(yīng)。若要明確受者的抗體是抗Ⅰ類抗原還是抗Ⅱ類抗原，可以將供者的淋巴細(xì)胞進(jìn)一步分離出較純的T細(xì)胞和B細(xì)胞分別進(jìn)行檢測(cè)；若要排除患者自身抗體的影響，可以用患者自己的細(xì)胞與自已的血清進(jìn)行試驗(yàn)作為對(duì)照。
交叉配合是移值前必須做的一個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目；對(duì)一些曾經(jīng)接觸過(guò)移植抗原的受者，例如多次接受輸血者、經(jīng)產(chǎn)婦、有不成功移植史或接受過(guò)血清透析治療者，尤其要進(jìn)行審慎的檢驗(yàn)。
2．流式細(xì)胞儀檢測(cè)將供者淋巴細(xì)胞與受者血清共育后，用熒光標(biāo)記的抗人Ig對(duì)結(jié)合有抗體的細(xì)胞染色，在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行熒光標(biāo)記測(cè)定。該法比微量細(xì)胞毒法的靈敏度高100倍，有條件的單位可以優(yōu)先考慮使用。
3．混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)將供者與受者的淋巴細(xì)胞做雙向混合培養(yǎng)，或者滅活供者的淋巴細(xì)胞做向混合培養(yǎng)，細(xì)胞反應(yīng)的程度與供－受者相容的程度呈負(fù)相關(guān)。
4．細(xì)胞介導(dǎo)的淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)檢測(cè)受者對(duì)移植物可能發(fā)生的細(xì)胞介導(dǎo)的淋巴細(xì)胞毒作用（cell-mediatedlymphocytotoxicity，CML)。將受者淋巴細(xì)胞與滅活的供者淋巴細(xì)胞做常規(guī)單向MLC，收獲致敏的受者淋巴細(xì)胞后，再與51Cr標(biāo)記的、PHA刺激的供者淋巴細(xì)胞做CML試驗(yàn)；51Cr釋放的程度與供－受者相容程度呈負(fù)相關(guān)。
