2018年執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師考試學習筆記《動物生物化學》

執(zhí)業(yè)獸醫(yī)動物生物化學重點筆記

六、蛋白質的分離與純化:

1.鹽析與有機溶劑沉淀:在蛋白質溶液中加入大量中性鹽,以破壞蛋白質的膠體性質,使蛋白質從溶液中沉淀析出,稱為鹽析。常用的中性鹽有:硫酸銨、氯化鈉、硫酸鈉等。鹽析時,溶液的pH在蛋白質的等電點處效果最好。凡能與水以任意比例混合的有機溶劑,如乙醇、甲醇、丙酮等,均可引起蛋白質沉淀。

2.電泳:蛋白質分子在高于或低于其pI的溶液中帶凈的負或正電荷,因此在電場中可以移動。電泳遷移率的大小主要取決于蛋白質分子所帶電荷量以及分子大小。

3.透析:利用透析袋膜的超濾性質,可將大分子物質與小分子物質分離開。

4.層析:利用混合物中各組分理化性質的差異,在相互接觸的兩相(固定相與流動相)之間的分布不同而進行分離。主要有離子交換層析,凝膠層析,吸附層析及親和層析等,其中凝膠層析可用于測定蛋白質的分子量。

5.超速離心:利用物質密度的不同,經超速離心后,分布于不同的液層而分離。超速離心也可用來測定蛋白質的分子量,蛋白質的分子量與其沉降系數(shù)S成正比。

七、氨基酸順序分析:

蛋白質多肽鏈的氨基酸順序分析,即蛋白質一級結構的測定,主要有以下幾個步驟:

1. 分離純化蛋白質,得到一定量的蛋白質純品;

2. 取一定量的樣品進行完全水解,再測定蛋白質的氨基酸組成;

3. 分析蛋白質的N-端和C-端氨基酸;

4. 采用特異性的酶(如胰凝乳蛋白酶)或化學試劑(如溴化氰)將蛋白質處理為若干條肽段;

5. 分離純化單一肽段;

測定各條肽段的氨基酸順序。一般采用Edman降解法,用異硫氰酸苯酯進行反應,將氨基酸降解后,逐一進行測定;

7. 至少用兩種不同的方法處理蛋白質,分別得到其肽段的氨基酸順序;

8. 將兩套不同肽段的氨基酸順序進行比較,以獲得完整的蛋白質分子的氨基酸順序。

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