一種防治血栓性疾病的新的蛇毒類凝血酶結(jié)構(gòu)及純化
公開(公告)號
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CN1151254C
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公開(公告)日
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2004.05.26
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申請(專利)號
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CN01108029.9
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申請日期
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2001.01.08
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專利名稱
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一種防治血栓性疾病的新的蛇毒類凝血酶結(jié)構(gòu)及純化
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主分類號
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C12N9/74
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分類號
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C12N9/74;A61K38/43;A61P7/02
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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中國藥科大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計)人
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吳梧桐;孔毅;高向東
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地址
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210009 江蘇省南京中央路童家巷24號
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頒證日
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2004.05.26
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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南京蘇科專利代理有限責(zé)任公司
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代理人
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周和平;徐冬濤
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國省代碼
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江蘇;32
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主權(quán)項
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一種源于尖吻蝮蛇的防治血栓性疾病的類凝血酶,N-末端氨基酸殘基的排列順序為N-DSPSPWGWYDYDQYQ,由兩條相同的亞基組成,分子量為30298Da,最適pH為7.0~7.5,穩(wěn)定pH為4.0~9.0,可用主要包括依次進(jìn)行的下述柱層析方法得到:(1)DEAE柱層析,層析條件為:流動相A為0.01~0.02mol/L,pH8.2~8.8的Tris-HCl緩沖液,B為含1mol/LNaCl的A液,流速為3ml/min,采用二元梯度洗脫,或者層析條件為:流動相A為0.01~0.02mol/L,pH7.2~7.8的Tris-HCl緩沖液,B為含1mol/LNaCl的A液,流速為3ml/min,采用二元梯度洗脫,(2)經(jīng)Mono Q柱層析,或者SOURCE Q柱層析純化;MonoQ柱層析條件為:流動相A為0.01~0.02mol/L,pH7.8~8.2的Tris-HCl緩沖液,B為含1mol/LNaCl的A液,流速:1ml/min,采用二元梯度洗脫,SOURCEQ柱層析條件為:流動相A為0.01~0.02mol/L,pH7.8~8.2的Tris-HCl緩沖液,B為含0.3mol/LNaCl的A液,流速:3ml/min,采用二元梯度洗脫,(3)經(jīng)RESOURCE RPC柱純化,層析條件為:流動相A為含0.1%TFA的水溶液,B為含0.1%TFA的乙腈溶液,流速為3ml/min采用二元梯度洗脫,
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摘要
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本發(fā)明公開了一種源于尖吻蝮蛇毒的防治血栓性疾病的新的類凝血酶(TLE)的N-端氨基酸序列及其純化方法,該酶由兩條相同的亞基組成,分子量為30298Da,最適pH為7.0~7.5,穩(wěn)定pH為4.0~9.0,其N-端15個氨基酸殘基序列為N-DSPSPWGWYDYDQYQ,能有效抑制大鼠動脈血栓的形成,并對家兔耳緣靜脈血栓有明顯的溶栓作用。
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國際公布
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