| 公開(公告)號(hào) | CN1511953A |
| 公開(公告)日 | 2004.07.14 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN02159949.1 |
| 申請(qǐng)日期 | 2002.12.30 |
| 專利名稱 | 一種重組人淋巴毒素α的構(gòu)建與生產(chǎn)工藝 |
| 主分類號(hào) | C12N15/70 |
| 分類號(hào) | C12N15/70;C12N15/19;C12N1/21;C12P21/02;C07K1/18;C07K14/52 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 北京三元基因工程有限公司;北京畢艾歐科技發(fā)展有限責(zé)任公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 劉永全;牛曉霞;劉金毅;孫儉波;程永慶 |
| 地址 | 102600北京市大興工業(yè)開發(fā)區(qū)金苑路1號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種重組人淋巴毒素α(rhLT-α)的構(gòu)建與生產(chǎn)工藝，主要包括：用RT-PCR的方法獲得rhLT-α的cDNA，并將其克隆入原核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌獲得工程菌株，工程菌通過一系列的發(fā)酵、粗純和精制過程獲得rhLT-α純品，其特征在于：(1)rhLT-α與天然分子相比，N端缺失了27個(gè)氨基酸殘基，包括附加上的第一個(gè)甲硫氨酸殘基，整個(gè)分子共有145個(gè)氨基酸殘基組成；(2)所用的原核表達(dá)載體帶有T7啟動(dòng)子；(3)發(fā)酵培養(yǎng)基使用改良M9培養(yǎng)基或其它適合工程菌生長的培養(yǎng)基；(4)包涵體洗滌后用高濃度的尿素或鹽酸胍增溶；(5)復(fù)性液使用Tris-HCl緩沖液或硼酸溶液；(6)相繼用陰離子交換柱層析、Phenyl-Sepharose FF疏水柱層析和陰離子交換柱層析進(jìn)行純化。 |
| 摘要 | 本發(fā)明的rhLT-α與天然分子相比，其N端缺失了27個(gè)氨基酸殘基，本表明利用反轉(zhuǎn)錄PCR獲得了目的基因序列，然后構(gòu)建了高效重組表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌獲得高表達(dá)工程菌株，并建立了工程菌發(fā)酵、包涵體洗滌和復(fù)性、以及利用多種層析介質(zhì)獲得rhLT-α純品的方法。純化總收率高于40％，樣品純度高于99％，比活性與國際同類產(chǎn)品相當(dāng)。因此本發(fā)明得到的工程菌和建立的純化工藝適合于rhLT-α的大規(guī)模生產(chǎn)。 |
| 國際公布 |
