| 公開(公告)號 | CN1165548C |
| 公開(公告)日 | 2004.09.08 |
| 申請(專利)號 | CN00112156.1 |
| 申請日期 | 2000.03.21 |
| 專利名稱 | 人體心肌肌鈣蛋白Ⅰ的純化方法 |
| 主分類號 | C07K14/435 |
| 分類號 | C07K14/435;C07K16/18;C12Q1/28 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 上海潤東生物科技有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 張寄南;蘇恩本 |
| 地址 | 上海市浦東桃林路18號B樓2405室 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 俆冬濤 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 人體心肌肌鈣蛋白I的純化方法，其特征在于包含如下步驟：(1)取人體新鮮或速凍冷藏的心肌組織，去脂肪及纖維，經(jīng)勻漿、離心、沉淀、抽提、高鹽溶解等步驟處理后，在層析介質(zhì)為CMSephadex-C50、Cellulose-DE52，緩沖體系為Tris-HCl，pH值為7.2～7.8，尿素含量為6～8mol/L條件下依次進(jìn)行層析，分別收集含心肌肌鈣蛋白C(cTnC)和心肌肌鈣蛋白I(cTnI)的蛋白峰；(2)取上述步驟(1)所得心肌肌鈣蛋白C，在偶聯(lián)溶液為0.1～0.3mol/LNaHCO3，pH值為7.8～8.5，3～6mmol/LCaCl2，平衡緩沖液為45～55mmol/LTris-HCl，8～10mol/L尿素，0.8～1.2mmol/LCaCl2，12～18mmol/L β巰基乙醇，pH值為7.8～8.2的條件下與Sepharose 4B親和層析柱相偶聯(lián)，制備成Sepharose 4B親和層析柱；(3)取上述步驟(1)經(jīng)CM Sephadex-C50層析后的粗提品的心肌肌鈣蛋白I峰收集液，再加入步驟(2)所得Sepharose 4B親和層析柱進(jìn)行親和層析，即得純化的心肌肌鈣蛋白I。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了人體心肌肌鈣蛋白I的純化和其單克隆抗體的制備方法以及一步法測定其含量的方法。其特點是采用親和層析法純化人體心肌肌鈣蛋白I，利用該純化的心肌肌鈣蛋白I與BALB/c小鼠免疫制備該心肌肌鈣蛋白I的單克隆抗體，并建立了一步法測定心肌肌鈣蛋白I含量的方法。其優(yōu)點是所得抗體的同源性好，特異性和敏感性高。其檢測方法操作簡單，成本低�？蓮V泛用于心臟病的檢查。 |
| 國際公布 |
