| 公開(公告)號 | CN1706944A |
| 公開(公告)日 | 2005.12.14 |
| 申請(專利)號 | CN200410055547.8 |
| 申請日期 | 2004.08.04 |
| 專利名稱 | 重組人腦鈉素在大腸桿菌中的表達、純化與鑒定方法 |
| 主分類號 | C12N15/12 |
| 分類號 | C12N15/12;C12N15/70;C12N15/62;C07K14/435;C07K1/14;G01N33/68;A61K38/17;A61P9/00 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2004.6.4 CN 200410044916.3 |
| 申請(專利權(quán))人 | 南京大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 劉建寧;孫自勇;朱鎮(zhèn)華;張 菁;張 巍 |
| 地址 | 210093江蘇省南京市漢口路22號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 夏 平 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項 | 一種重組人腦鈉素在大腸桿菌中的表達、純化、鑒定方法，其特征在于：a.在DNA水平，將人腦鈉素雙鏈DNA雙酶切產(chǎn)物與經(jīng)過雙酶切消化的表達質(zhì)粒pET32a連接，該連接產(chǎn)物用大腸桿菌表達系統(tǒng)表達制備成硫氧還蛋白-腦鈉素融合蛋白，該硫氧還蛋白-腦鈉素融合蛋白中的腦鈉素為重組人腦鈉素；b.將表達制備成的硫氧還蛋白-腦鈉素融合蛋白經(jīng)腸激酶酶解處理后，酶解產(chǎn)物中的硫氧還蛋白以及少量未被酶解的硫氧還蛋白-腦鈉素融合蛋白被吸附到Zn-Sepharose親和柱上，硫氧還蛋白-腦鈉素融合蛋白中的重組人腦鈉素留存于樣品穿過液中；c.用兔胸主動脈條的血管舒張效應(yīng)測定上述重組人腦鈉素的生物活性。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種治療充血型心衰竭的多肽藥物的表達、純化及鑒定方法，屬于生物技術(shù)制藥中的基因工程生產(chǎn)多肽藥物的技術(shù)領(lǐng)域。其目的是制備多肽藥物重組人腦鈉素(rhBNP)，用于治療充血型心衰竭。重組人腦鈉素(rhBNP)是用基因工程方法生產(chǎn)的多肽，利用硫氧還蛋白融合表達系統(tǒng)高效表達，經(jīng)分離純化獲得目標(biāo)多肽。體外活性測定結(jié)果表明，制備的重組人腦鈉素(rhBNP)樣品對兔胸主動脈條具有顯著的血管舒張效應(yīng)，具有和標(biāo)準(zhǔn)品相似的比活性。 |
| 國際公布 |
