公開(公告)號
|
CN1250739C
|
公開(公告)日
|
2006.04.12
|
申請(專利)號
|
CN01120369.2
|
申請日期
|
2001.08.23
|
專利名稱
|
低成癮性鎮(zhèn)痛藥物高通量篩選平臺
|
主分類號
|
C12Q1/04(2006.01)I
|
分類號
|
C12Q1/04(2006.01)I
|
分案原申請?zhí)? |
|
優(yōu)先權
|
|
申請(專利權)人
|
中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所
|
發(fā)明(設計)人
|
段海清;張兆山
|
地址
|
100071北京市豐臺區(qū)東大街20號國家生物醫(yī)學分析中心
|
頒證日
|
|
國際申請
|
|
進入國家日期
|
|
專利代理機構
|
北京紀凱知識產(chǎn)權代理有限公司
|
代理人
|
關 暢
|
國省代碼
|
北京;11
|
主權項
|
一種低成癮性鎮(zhèn)痛藥物的高通量篩選方法,包括以下步驟: 1)將無血清微載體培養(yǎng)的CHO衍生工程細胞株CHO-OPR8CGMCC№0613及CHO衍生工程細胞株CHO-PCGMCC№0612分別裝入層析柱中,得到CHO-OPR8層析柱及CHO-P層析柱;所述微載體培養(yǎng)是在培養(yǎng)基中加入了2-20mg/ml的大孔徑明膠微載體; 2)將待選擇的5肽庫和15肽庫分別上樣到CHO-OPR8層析柱,洗滌層析柱后采用洗脫液洗脫與CHO-OPR8特異結合的樣品,將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱,收集穿過峰,得到第一輪篩選出的候選多肽; 3)將第一輪篩選出的候選多肽再上樣到CHO-OPR8層析柱,將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱,收集穿過峰,得到第二輪篩選出的候選多肽; 4)將第二輪篩選出的候選多肽再上樣到CHO-OPR8層析柱,將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱,收集穿過峰,得到第三輪篩選出的候選多肽; 5)將最后一輪篩選的噬菌體全部轉(zhuǎn)染K91Kan,挑選陽性菌株進行接種培養(yǎng),提取質(zhì)粒,進行序列分析; 6)將復制型噬菌體質(zhì)粒的序列分析結果與空載體的序列進行比較,尋找插入片段的核苷酸序列,推導出氨基酸序列,并將序列進行一級結構的比較和二級結構的分析,得到目的多肽。
|
摘要
|
本發(fā)明公開了一個低成癮性鎮(zhèn)痛藥物高通量篩選平臺。低成癮性鎮(zhèn)痛藥物的高通量篩選方法包括以下步驟:1)將細胞株CHO-OPR8及CHO-PCGMCC分別裝入層析柱中,得到CHO-OPR8層析柱及CHO-P層析柱;2)將待選擇的5肽庫和15肽庫分別上樣到CHO-OPR8層析柱,將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱,收集穿過峰,得到第一輪篩選出的候選多肽;3)第二輪洗滌;4)第三輪洗滌;5)將最后一輪篩選的噬菌體全部轉(zhuǎn)染K91Kan,挑選陽性菌株進行接種培養(yǎng),提取質(zhì)粒,進行序列分析;6)將復制型噬菌體質(zhì)粒的序列分析結果與空載體進行比較,尋找插入片段的核苷酸序列,推導出氨基酸序列,得到目的多肽。
|
國際公布
|
|