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低成癮性鎮(zhèn)痛藥物高通量篩選平臺

公開(公告)號 CN1250739C  
公開(公告)日 2006.04.12  
申請(專利)號 CN01120369.2  
申請日期 2001.08.23  
專利名稱 低成癮性鎮(zhèn)痛藥物高通量篩選平臺  
主分類號 C12Q1/04(2006.01)I  
分類號 C12Q1/04(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權  
申請(專利權)人 中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所  
發(fā)明(設計)人 段海清;張兆山  
地址 100071北京市豐臺區(qū)東大街20號國家生物醫(yī)學分析中心  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構 北京紀凱知識產(chǎn)權代理有限公司  
代理人 關 暢  
國省代碼 北京;11  
主權項 一種低成癮性鎮(zhèn)痛藥物的高通量篩選方法,包括以下步驟: 1)將無血清微載體培養(yǎng)的CHO衍生工程細胞株CHO-OPR8CGMCC№0613及CHO衍生工程細胞株CHO-PCGMCC№0612分別裝入層析柱中,得到CHO-OPR8層析柱及CHO-P層析柱;所述微載體培養(yǎng)是在培養(yǎng)基中加入了2-20mg/ml的大孔徑明膠微載體; 2)將待選擇的5肽庫和15肽庫分別上樣到CHO-OPR8層析柱,洗滌層析柱后采用洗脫液洗脫與CHO-OPR8特異結合的樣品,將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱,收集穿過峰,得到第一輪篩選出的候選多肽; 3)將第一輪篩選出的候選多肽再上樣到CHO-OPR8層析柱,將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱,收集穿過峰,得到第二輪篩選出的候選多肽; 4)將第二輪篩選出的候選多肽再上樣到CHO-OPR8層析柱,將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱,收集穿過峰,得到第三輪篩選出的候選多肽; 5)將最后一輪篩選的噬菌體全部轉(zhuǎn)染K91Kan,挑選陽性菌株進行接種培養(yǎng),提取質(zhì)粒,進行序列分析; 6)將復制型噬菌體質(zhì)粒的序列分析結果與空載體的序列進行比較,尋找插入片段的核苷酸序列,推導出基酸序列,并將序列進行一級結構的比較和二級結構的分析,得到目的多肽。  
摘要 本發(fā)明公開了一個低成癮性鎮(zhèn)痛藥物高通量篩選平臺。低成癮性鎮(zhèn)痛藥物的高通量篩選方法包括以下步驟:1)將細胞株CHO-OPR8及CHO-PCGMCC分別裝入層析柱中,得到CHO-OPR8層析柱及CHO-P層析柱;2)將待選擇的5肽庫和15肽庫分別上樣到CHO-OPR8層析柱,將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱,收集穿過峰,得到第一輪篩選出的候選多肽;3)第二輪洗滌;4)第三輪洗滌;5)將最后一輪篩選的噬菌體全部轉(zhuǎn)染K91Kan,挑選陽性菌株進行接種培養(yǎng),提取質(zhì)粒,進行序列分析;6)將復制型噬菌體質(zhì)粒的序列分析結果與空載體進行比較,尋找插入片段的核苷酸序列,推導出氨基酸序列,得到目的多肽。  
國際公布  
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