作者：張慶俠，郝建華，倪琳婷，程瓊，周天祥
作者單位：深圳市第六人民醫(yī)院，廣東 深圳 518052
【摘要】 目的：比較經(jīng)典法、改良法和微柱凝膠法抗人球蛋白試驗(yàn)檢測孕婦血清中IgG抗A（B)效價(jià)的差異。方法：用經(jīng)典法、改良法和微柱凝膠法分別檢測136例孕婦血清中IgG抗A（B)效價(jià) ，計(jì)算其陽性率，再以經(jīng)典法為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算改良法和微柱凝膠法的特異性和敏感性。結(jié)果： 經(jīng)典法、改良法和微柱凝膠法檢測孕婦血清中IgG抗A效價(jià)的陽性率分別為22.8%、25.0%和33.8%，IgG抗B效價(jià)的陽性率分別為19.1%、20.5%和31.6%。與經(jīng)典法比較,改良法敏感性為98.1%，特異性為96.3%；微柱凝膠法敏感性為100%，特異性為63.4%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，,改良法和經(jīng)典法的陽性率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05)，而微柱凝膠法陽性率明顯高于經(jīng)典法（P<0.01)。結(jié)論：改良法和經(jīng)典法檢測孕婦血清中IgG抗A（B)效價(jià)的結(jié)果具有良好的一致性 ，而微柱凝膠法陽性率明顯高于經(jīng)典法，需重新設(shè)定臨床意義決定值。
【關(guān)鍵詞】 孕婦；IgG抗A（B)效價(jià)；抗人球蛋白試驗(yàn)；經(jīng)典；改良；微柱凝膠
Comparing the Results of the Determination of AntiA(B) IgG Titers with Three Assays in the Pregnant Women
ZHANG Qingxia，HAO Jianhua，NI Linting，CHENG Qiong,ZHOU Tianxiang
The Sixth People’s Hospital of Shenzhen，Shenzhen,Guangdong 518052,China
Abstract:Objective To study comparatively the different of microcolumn gel(MCG),improvement and classic Coombs，test in the determination of antiA(B)IgG titers of the pregnant women.Methods Sera were obtained from 136 pregnant women，AntiA(B)IgG titers were determined respectively by the MCG，improvement and classic Coombs，test .The positive rate，sensitivity and specificity of three assays were evaluated.Results The positive rate of antiA IgG titers with MCG，improvement and classic Coombs，test were separately 33.8%、25.0% and 22.8% ,that of antiB IgG titerswere respectively 31.6%、20.5% and 19.1% in the pregnant women. The positive rate of antiA(B) IgG titers with improvement and classic Coombs，test were not different（P>0.05);The positive rate of antiA(B) IgG titers with MCG were significant higher than classic one(P<0.01). Thesensitivity and specificity of improvement Coombs，test were separately 98.1% and 96.3% comparing with classic one and the same of MCG were respectively 100% and 63.4% .Conclusion The improvement and classic Coombs，test showed good agreement in their result ,but MCG has higher positive rate than classicCoombs，test ,which is necessary to decide reference value ofits results.
Key words:Pregnant women;AntiA(B)IgG titers;Coombs test;Classic；Improvement;Microcolumn gel
母兒ABO血型不合，激活母體免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生對(duì)胎兒紅細(xì)胞抗原的特異抗體，其中IgG抗A（B)抗體是引起新生兒溶血病（HDN)的主要原因之一。臨床上常用經(jīng)典抗人球蛋白法(經(jīng)典法)檢測血清IgG抗A（B)抗體預(yù)測HDN發(fā)生的可能性［1］，此方法操作復(fù)雜且耗時(shí)長,限制了臨床的應(yīng)用。近年來改良抗人球蛋白法IgG抗A（B)抗體測定試劑合(改良法) ［2］和微柱凝膠抗人球蛋白法(微柱凝膠法) ［3］的應(yīng)用使此種檢測變的簡單、快速,但目前這些方法的一致性尚未見系統(tǒng)報(bào)道。本文利用經(jīng)典法、改良法和微柱凝膠法分別檢測孕婦血清中IgG抗A（B)效價(jià)，用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析三種檢測方法的差異，報(bào)道如下。
1 資料與方法
1.1 對(duì)象
來自我院產(chǎn)科門診孕20周以上夫婦ABO血型不同的O型孕婦136例,年齡19歲～38歲,平均年齡(28.6±4.0)歲。
1.2 材料
抗A抗B血型定型試劑,抗人球蛋白試劑為上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司產(chǎn)品； 改良抗人球蛋白法IgG抗A（B)抗體測定試劑盒由深圳市伯勞特生物制品有限公司提供；抗人球蛋白微柱凝膠卡和西班牙戴安娜半自動(dòng)血型系統(tǒng)由北京斑珀斯技貿(mào)有限公司提供。
1.3 方法
取O型孕婦靜脈血，分離血清，分別用經(jīng)典法、改良法和微柱凝膠法檢測IgG抗A（B)效價(jià)。
1.3.1 經(jīng)典法
按照全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第三版［IgG抗A（B)測定］的方法檢測［4］。
1.3.2 改良法
按IgG抗A（B)抗體測定試劑盒使用說明書檢測。
1.3.3 微柱凝膠法
按抗人球蛋白微柱凝膠卡使用說明書操作。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
樣本陽性率的差異采用χ2檢驗(yàn)。
2 結(jié)果
按照經(jīng)典法檢測結(jié)果，IgG抗A（B)效價(jià)≤32為陰性，≥64為陽性［5］，則經(jīng)典法、改良法和微柱凝膠法檢測136孕婦血清IgG抗A效價(jià)的陽性率分別為22.8%、25.0%和33.8%；IgG抗B效價(jià)的陽性率分別為19.1%、20.5%和31.6%。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，經(jīng)典法和改良法陽性率無明顯差異（P>0.05)，而微柱凝膠法陽性率明顯高于經(jīng)典法（P<0.01)，見表1。表1 三種方法檢測136例孕婦血清IgG抗A(B)效價(jià)的比較（略)注：*改良法與經(jīng)典法比較P>0.05；△微柱凝膠法與經(jīng)典法比較P<0.01。
在經(jīng)典法檢測陽性孕婦54例中,改良法檢測53例呈陽性，1例呈陰性；微柱凝膠法檢測54例均呈陽性。經(jīng)典法檢測陰性孕婦82例中，改良法檢測79例呈陰性，3例呈陽性；微柱凝膠法檢測52例呈陰性，30例呈陽性。以經(jīng)典法為標(biāo)準(zhǔn)，改良法的敏感性為98.1%(53/54)，特異性為96.3%(79/82)，www.med126.com見表2；微柱凝膠法的敏感性為100%(54/54)，特異性為63.4%(52/82)，見表3。表2 改良法與經(jīng)典法檢測136例孕婦血清IgG抗A(B)效價(jià)的比較(略)表3 微柱凝膠法與經(jīng)典法檢測136例孕婦血清IgG抗A(B)效價(jià)的比較(略)
3 討論
ABO抗原在自然界存在較廣，孕婦在妊娠前可能已接受了不同程度的A（B)類抗原的刺激產(chǎn)生血型抗體， O型的血型抗體含有較多的IgG，它可以通過胎盤進(jìn)入胎兒血液，使紅細(xì)胞致敏引起新生兒溶血和黃疸，臨床上通常檢測孕婦血清IgG抗A（B)效價(jià)預(yù)測HDN可能性［6］。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道當(dāng)IgG抗A（B)效價(jià)＜64時(shí)，很少發(fā)生HDN，隨著IgG抗體效價(jià)升高，HDN發(fā)生率明顯增加［7］。但目前檢測孕婦血清IgG抗A（B)效價(jià)的方法較多，各種方法的敏感性不同，造成同一標(biāo)本用不同檢測方法結(jié)果差異較大，給臨床診治帶來困難。
抗人球蛋白試驗(yàn)是由英國免疫學(xué)家Coombs于1945年發(fā)明,用于檢測Rh血型的不完全抗體,又稱Coombs試驗(yàn)。其原理是IgG類免疫球蛋白多以單體形式存在，它只能和一個(gè)抗原相結(jié)合，而不能把幾個(gè)抗原聯(lián)合起來，故在鹽水介質(zhì)中不表現(xiàn)凝集反應(yīng)；另外，IgG分子較小，無法克服紅細(xì)胞膜之間的相互排斥距離，故不能將二個(gè)鄰近的紅細(xì)胞架接起來，但若將抗人球蛋白血清加到吸附了半抗體的紅細(xì)胞懸液中，抗人球蛋白便起到一種橋梁作用使致敏紅細(xì)胞發(fā)生凝集，從而顯示不完全抗體的存在。到目前為止，此試驗(yàn)仍是國際上公認(rèn)的檢測孕婦血清IgG抗A（B)效價(jià)的經(jīng)典方法，根據(jù)其測定的結(jié)果，將IgG抗A（B)效價(jià)大于或等于64作為臨床意義決定值預(yù)測HDN可能性已普遍得到學(xué)者的認(rèn)可［8］，但此方法操作繁鎖,耗時(shí)長，需要實(shí)驗(yàn)室自配試劑，不便于臨床應(yīng)用。
改良法是在經(jīng)典法基礎(chǔ)上，用二硫蘇糖醇替代巰基乙醇裂解IgM分子，使裂解時(shí)間從2 h減至30 min；用低離子介質(zhì)促進(jìn)IgG抗體致敏紅細(xì)胞使致敏時(shí)間從1 h減至30 min；用抗人IgG代替廣譜的抗人球蛋白試劑提高抗原抗體反應(yīng)的特異性。本文結(jié)果顯示，與經(jīng)典法比較，改良法敏感性為98.1%，特異性為96.3%，兩者的結(jié)果具有良好的一致性，而且改良法明顯縮短了操作時(shí)間，又有統(tǒng)一的商品試劑盒，便于臨床普及。
微柱凝膠技術(shù)由法國科學(xué)家Lappierre于1986年發(fā)明,1994年獲得美國FDA認(rèn)證，目前在許多發(fā)達(dá)國家已作為常規(guī)技術(shù)應(yīng)用于紅細(xì)胞血型鑒定、交叉配血、抗體篩查和HDN的檢查。其原理是利用紅細(xì)胞在凝膠微柱中的移動(dòng)來指示肉眼所不能見的紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體發(fā)生的血清學(xué)反應(yīng)。檢測時(shí)首先將待檢血清用巰基乙醇裂解IgM抗體，然后和A(B)型紅細(xì)胞混合加在凝膠微柱上部反應(yīng),待檢血清中IgG抗A（B)就會(huì)與相應(yīng)紅細(xì)胞結(jié)合，再與凝膠中抗人球蛋白結(jié)合形成凝集反應(yīng)，經(jīng)離心后觀察：凝集的紅細(xì)胞被阻擋在微柱中凝膠的上部或中央，判斷凝集反應(yīng)陽性；未被抗體結(jié)合的紅細(xì)胞能通過凝膠的縫隙到達(dá)微柱的底部，判斷凝集反應(yīng)陰性。因其操作簡單，實(shí)驗(yàn)中不用洗滌紅細(xì)胞，減少了生物污染，保障了操作人員的安全，而且可以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作和電腦化管理。本文結(jié)果顯示，與經(jīng)典法比較其敏感性為100%，而特異性僅為63.4%，假陽性率達(dá)36.6%。李建新等［9］用微柱凝膠法和傳統(tǒng)試管法（經(jīng)典法)平行檢測53例O型孕婦IgG抗A（B)的平均抗體效價(jià)為160和45，前者比后者高3.56倍，兩法差異非常顯著（P<0.001)，提出微柱凝膠法靈敏度過高，需對(duì)其決定值進(jìn)行界定。吳定昌等［10］用微柱凝膠法檢測201例孕婦，IgG抗A（B)抗體效價(jià)≥64的陽性例數(shù)為164例，總陽性率為81.6%，認(rèn)為微柱凝膠法比傳統(tǒng)試管法檢測IgG抗A（B)效價(jià)高，結(jié)果更敏感（P<0.01)，通過回歸方程計(jì)算，微柱凝膠法臨床意義決定值的效價(jià)為138�？梢娢⒅z法用于檢測IgG抗A（B)抗體效價(jià)需重新設(shè)定臨床意義決定值，以免給臨床造成誤診。
綜上所述，改良法和經(jīng)典法檢測孕婦血清中IgG抗A（B)效價(jià)的結(jié)果具有良好的一致性 ，而微柱凝膠法陽性率明顯高于經(jīng)典法，需重新設(shè)定臨床意義決定值。
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