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中國幽門螺桿菌研究:幽門螺桿菌的檢測與致病性

1983的Warran和Marshall從慢性胃炎患者胃粘膜中培養(yǎng)出(Hp)幽門螺桿菌,并認為Hp與慢性活動性胃炎和消化性疾病的致病過程有關。引起國內(nèi)外學者的廣泛重視。我院自1987年開始逐步深入對Hp進行了研究,重點對胃部有明顯癥狀的慢性患者1362例(男922例,女440例)進行了全…

1983的Warran和Marshall從慢性胃炎患者胃粘膜中培養(yǎng)出(Hp)幽門螺桿菌,并認為Hp與慢性活動性胃炎和消化性疾病的致病過程有關。引起國內(nèi)外學者的廣泛重視。我院自1987年開始逐步深入對Hp進行了研究,重點對胃部有明顯癥狀的慢性患者1362例(男922例,女440例)進行了全而系統(tǒng)的檢查和觀察。報道如下。

1 檢測方法

1.1 涂片染色檢測

胃活檢組織直接涂片染色觀察,分別用革蘭染色,或0.1%葉啶橙,1%美藍和1%堿性復紅染色。后者染色速度最快、易觀察。Hp呈粉紅色,多數(shù)成片分布,S形,螺旋形,海形或桿狀。另外組織切片,免疫鍍銀染色后,免疫熒光顯微鏡觀察。操作稍復雜,特別要注意Hp抗原性的保存,否則不易成功。此法敏感性和特異性較高。切片Warthin-Starry銀染,方便,易觀察,也是廣泛采用的一種。

1.2 電鏡對Hp的超微結(jié)構(gòu)觀察

Hp表面光滑,兩端鈍圓,有1~6根帶鞘鞭毛。菌體長約1.5μm~6μm,寬6.5μm,胃竇部Hp稍長,其它部位的較短,Hp呈彎曲形或S型、V型、環(huán)形、小球形及桿狀等,細菌常多個或散在分布于胃粘膜上皮微絨毛之間,Hp存在處病理主要異常為上皮微絨毛減少,消失、斷裂、部分不規(guī)則包繞菌體。

1.3 快速尿素酶試驗

目前已有試劑盒,使用方便、快速、便宜,但特異性不強。Hp能產(chǎn)生大量的尿素酶,凡是產(chǎn)生尿素酶的細菌如空腸螺桿菌,變形桿菌等,都水解尿素,也呈陽性結(jié)果。

1.4 Hp細菌培養(yǎng)

一般條件難以生長,生長環(huán)境要求5%O2,5%~10%CO2,85%N2,5%~10%H2,37℃3d~5d。Hp為微嗜氧菌,此菌需血瓊脂(Skirrow配方)或巧克力培養(yǎng)基,在培養(yǎng)基中必須加入抗生素(萬古毒素,多粘菌素,兩性毒素B等),以抑制其它雜菌生長。菌落較小,光滑、濕潤、半透明灰色。扁圓形,微隆起。培養(yǎng)長時間可見溶血現(xiàn)象。能產(chǎn)生多種酶,尿素酶(+)、觸酶(+)、氧化酶(+)、馬尿酸水解(-)、靛基質(zhì)(-)、H2S(+)。

1.5 Hp血清檢測法

上述幾種方法均需通過胃鏡檢查完成。由于取材困難,又建立免疫學方法,采用血清樣本。酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)敏感性強,穩(wěn)定。Hp培養(yǎng)陽性者,發(fā)現(xiàn)所有患者血清含抗Hp抗體,IgG明顯升高,Hp抗體效價在1:320以上者,確定有Hp胃感染。補體固定試驗操作繁鎖,敏感性低,應用受限。另外血球凝集試驗,是將Hp制成抗原,患者血清對Hp的H抗原有凝集反應。但特異性和敏感性均較差。

1.6 C13和C14尿素的呼吸試驗

尿素很可能是Hp生長因素之一,在胃粘膜上皮細胞結(jié)合處有很高濃度尿素存在,Hp分解尿素為CO2和NH4+,而Hp感染者尿素顯著降低。據(jù)述上述原理,患者口服C13或C14標記的尿素溶液。兒童多采用C13,1mg/kg,構(gòu)術緣酸為試,隨之每10min收集一次呼氣標本,持續(xù)3h測定呼氣中CO2含量。此法安全可靠快速不需要胃組織活檢,13C系天然放射性同位素,可反復使用,價格便宜。因條件限制不能普及。

1.7 氣相色譜分析法

能對Hp菌體脂肪酶化學結(jié)構(gòu)中DNA的堿基(G+C)含量進行分析,能測定Hp菌株的屬性,在科研和臨床上都具有實際指導作用。

1.8 聚合酶鏈反應(polymerasewww.med126.com chain reaction,PCR)技術

PCR為近年來新開發(fā)的一種分子生物學方面的最新試驗,技術簡單快速、可靠、敏感性高、特異性強。而且能準確地評估治療前后Hp菌株屬型以及是否根除。另外對胃粘膜以外的Hp,如胃液、口腔、糞便中常規(guī)法不易檢出的Hp菌株也能檢出。其次PCR還可用于人群普查,觀察Hp感染并確定其來源和途徑。PCR技術的廣泛應用,對Hp流行病學、傳染病學及遺傳病學的研究方面引到重要作用。

2 Hp特性及感染情況

我院觀察了有胃部明顯癥狀的慢性患者362例,Hp陽性1157例(84.9%)。其中慢性胃炎占Hp陽性為81.4%。目前已被公認Hp是慢性胃炎的病因,雖然十二指腸潰瘍病病因涉及多種因素。但“無Hp無潰瘍”的觀點得到更多人的肯定,我院檢查的消化性潰瘍中,Hp陽性者為96.4%,也證明了這觀點。關于Hp是如何引起慢性胃炎和消化性潰瘍等病的病理機制,這是一種復雜的綜合性過程,首先Hp經(jīng)食物——口進入人體的,在胃粘膜中為寄生創(chuàng)造理想環(huán)境,引起機體炎癥或潰瘍,是Hp進行物理化學、免疫反應的結(jié)果。

Hp首先產(chǎn)生大量尿素酶,迅速分解尿素為堿性氨和CO2。氨呈云霧狀包圍Hp、使胃上皮細胞表面的pH升高,為Hp可在酸性環(huán)境中生存創(chuàng)造重要條件。氨能干擾三羥酸循環(huán),可分嗜中性粒細胞產(chǎn)生的氫氯酸結(jié)合,產(chǎn)生細胞毒性產(chǎn)物,如羥胺和氯化銨。氨對胃粘膜表面電荷梯度和通透性有影響,使H+回滲。氨對胃上皮細胞有直接毒害作用,細胞損傷與氨的濃度有直接關系,即與Hp數(shù)量和菌株密切。另外生成的CO2又抑制HCO3的產(chǎn)jfsoft.net.cn/wszg/生,增強胃蛋白酶對粘液的降解,因而破壞胃粘液碳酸鹽屏障,損傷胃粘膜組織。

Hp螺旋形,具有1~6條鞭毛,能在粘液中具有活躍的運動能力,侵入粘膜上皮細胞,破壞粘膜完整性,依靠其菌體表面菌毛樣網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),穩(wěn)定地定居于胃粘膜下和胃粘膜上皮之間。另外在胃粘膜內(nèi)含有可與Hp特異性結(jié)合的甘油脂類受體。受體,配體之間相互作用,使定居更穩(wěn)定。Hp定居后呈克隆性生長,產(chǎn)生多種物質(zhì)如脂多糖,細胞毒素和多種酶類,導致炎性細胞浸潤,細胞變性壞死。

Hp產(chǎn)生蛋白酶、脂肪酶和磷酯酶能夠隆解胃粘液的主要成分粘液糖蛋白,脂質(zhì)和脂蛋白,破壞粘膜層的完整性。Hp還產(chǎn)生蛋白溶解酶,能隆解粘分子,使粘膜層溶解成小窟穴,Hp逐漸向深部運動,侵入上皮細胞進入微絨毛間隙,再向胃小凹活動,深達腺頸部,Hp與胃粘膜分泌細胞有親和性,Hp多粘附在分泌細胞表面,而停止前進,在此導致胃粘膜的損傷和炎癥產(chǎn)生。另外磷脂酶可通過磷脂的破壞和溶血卵脂的產(chǎn)生損害上皮細胞。

Hp能產(chǎn)生大量的超氧化物岐化酶和過氧化氫酶能削弱主巨噬細胞及中性粒細胞的氧化殺傷機制有抵抗作用。另外Hp能分解各種你謝產(chǎn)物與宿主胃上皮細胞作用,引起炎癥浸潤,使細胞內(nèi)粘液消失,核極性喪失、核腫大,出現(xiàn)中性粒細胞及嗜酸粒細胞大量浸潤。

Hp某些菌株的脂多糖含有脂質(zhì)A、與革蘭陰生細菌的內(nèi)毒素活性有關的物質(zhì)。內(nèi)毒素能夠刺激巨噬細胞釋放多細胞激肽,如白細胞介素—1和腫瘤壞死因子,引起胃部炎癥和胃粘膜變性。脂質(zhì)A還能激活補體引起炎癥反應,影響胃粘膜上皮細胞的正常功能。

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