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中國(guó)幽門螺桿菌研究:抑制幽門螺桿菌中藥的篩選

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)于1983年由Warren和Marsjfsoft.net.cn/shouyi/hal首次從胃粘膜活檢標(biāo)本中分離并命名。越來越多的證據(jù)支持Hp是胃炎的致病菌,Hp感染與消化性潰瘍的發(fā)病也密切相關(guān)。中醫(yī)藥治療慢性胃炎及消化性潰瘍?nèi)〉昧肆己眯Ч,為進(jìn)一步提高療…

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)于1983年由Warren和Marsjfsoft.net.cn/shouyi/hal首次從胃粘膜活檢標(biāo)本中分離并命名。越來越多的證據(jù)支持Hp是胃炎的致病菌,Hp感染與消化性潰瘍的發(fā)病也密切相關(guān)。中醫(yī)藥治療慢性胃炎及消化性潰瘍?nèi)〉昧肆己眯Ч瑸檫M(jìn)一步提高療效,探討其機(jī)理,我們從不同性味,不同作用的200種中藥中作初步篩選,發(fā)現(xiàn)其中38種中藥對(duì)Hp有抑菌作用,F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.jfsoft.net.cn/yishi/1 Hp培養(yǎng)鑒定

患者因上消化道癥狀行胃鏡檢查226例,并診斷為慢性胃炎或消化性潰瘍。其中男175例,女51例,年齡16歲~70歲,平均39.1歲,病程3月~2a。本組病例排除了肝、腎和血液系統(tǒng)疾病。胃鏡檢查前1周,患者未用抗生素,鉍劑和影響胃酸分泌的藥物。Olympus胃鏡及活檢鉗均用2%戊二醛浸泡消毒15min,使用前用清水沖洗。選慢性胃炎和消化性潰瘍患者,用19K活檢鉗在胃竇部距幽門5cm范圍內(nèi)取胃粘膜標(biāo)本2塊,以無菌手續(xù)接種在改良Skirrow培養(yǎng)基(含萬古霉素10mg/L、多粘素B2500IU/L、TMP5mg/L)。培養(yǎng)基放在10%CO2、5%O2和85%N2條件下,37℃培養(yǎng)72h。226例均作了Hp培養(yǎng)。Hp菌落為半透明、灰色、濕潤(rùn)、稍隆起圓形。菌體革蘭染色陰性,呈彎曲,“S”形或“海”形。生化鑒定:尿素酶陽(yáng)性,氧化酶陽(yáng)性,在三糖鐵培養(yǎng)基上不發(fā)酵。不產(chǎn)H2S,醋酸試紙法H2S(+),對(duì)1%甘氨酸部分耐受,不還原硝酸鹽,不水解馬尿酸。

1.2 山藥抑菌試驗(yàn)

中藥煎液制備 將單味中藥分別浸泡,于燒杯中60min,在100℃條件下煎煮30min,取1:1(1g中藥煎出1ml藥液)煎液存放于無菌試管備用。

抑菌試驗(yàn)材料 改良Skirrow培養(yǎng)基,Hp懸液(108/ml),無菌海綿塊(圓形,厚2.5mm,直徑6.5mm,吸液量30μl/塊),中藥煎液,5%NaCl。方法:將Hp懸液均勻接種在改良Skirrow培養(yǎng)基上,用海綿塊吸取中藥液分別放置于上述培養(yǎng)基,5%NaCL未出現(xiàn)抑菌環(huán),無抑制Hp作用。其抑菌環(huán)的大小,顯示出不同中藥對(duì)Hp的不同抑菌程度,結(jié)果見表1。

表1 中藥對(duì)Hp抑菌結(jié)果

藥名抑菌環(huán)(mm)藥名抑菌環(huán)(mm)藥名抑菌環(huán)(mm)藥名抑菌環(huán)(mm)
黃 芩25山 楂22檳 榔16旱蓮草12
黃 連25厚 樸20五味子16麥 冬12
大 黃24枳 實(shí)19黃芪15元 胡12
黃 柏24白 芍19艾 葉15蒼 術(shù)11
桂 枝23香 附17沒 藥15女貞子10
地 丁23青天葵17畢 菝15川楝子10
玫瑰花23地 榆17豆蔻15黃 精9
茯苓23連 翹17瓜 蔞15生側(cè)柏9
高良22茵 陳16遠(yuǎn) 志145%Nacl0
烏 梅22苦 參16金櫻子14  

2 討論

Hp感染與慢性胃炎及消化性潰瘍的關(guān)系越來越受到重視。本組226例中60.2%檢出Hp,與文獻(xiàn)報(bào)道接近。多年來國(guó)內(nèi)用中醫(yī)藥辨證治療胃炎和消化性潰瘍?nèi)〉昧肆己眯Ч,為探討Hp這一致病因素與中藥治療胃胃及消化性潰瘍間的作用,我們做了常用中藥對(duì)Hp的抑菌實(shí)驗(yàn),中藥均選自不同性味、不同作用的單味藥。在200種藥中篩選出38種有不同大小的抑菌環(huán)出現(xiàn),說明有抑菌作用。5%NaCl作為高滲透壓作用的對(duì)照表明,未見抑菌環(huán)出現(xiàn),無抑菌作用,故可排除中藥煎劑可能產(chǎn)生的高滲透壓作用而出現(xiàn)假性抑制Hp生長(zhǎng)作用。

經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)初步篩選的38種中藥對(duì)Hp有抑菌作用,其中以黃芩、大黃黃柏、桂枝、地丁、玫瑰花、土茯苓高良姜、烏梅山楂等抑菌作用最明顯,最大抑菌環(huán)為25mm。張琳等曾用牛津杯法其實(shí)驗(yàn)結(jié)果見黃連抑菌作用明顯,我們所作結(jié)果與之相符。但其所見黃連抑菌環(huán)達(dá)41mm,可能與實(shí)驗(yàn)條件、方法等不同有關(guān)。我們所見黨參、枸杞子對(duì)Hp無明顯抑菌作用,與之報(bào)道不符;我們所見土茯芩、玫瑰花、高良姜等抑蓖作用明顯,但尚未見報(bào)道。

臨床實(shí)踐中,我們體會(huì)到選用對(duì)Hp有良好抑菌作用的中藥綜合辨證論治組方,對(duì)于患者臨床癥狀的減輕和消除,病理組織學(xué)的改善均有良好的促進(jìn)作用。梁方信等報(bào)道Hp陽(yáng)性的胃病51例后,66.7%Hp仍為陽(yáng)性,而94.1%患者可達(dá)到組織學(xué)康復(fù)或好轉(zhuǎn)。我們?cè)谂R床中亦發(fā)現(xiàn)有相同的一些病例,但對(duì)這部分Hp陽(yáng)性,無臨床癥狀,胃鏡下所見及病理組織學(xué)查檢已見有明顯好轉(zhuǎn)的患者繼續(xù)治療,則發(fā)現(xiàn)Hp仍可轉(zhuǎn)為陰性。因此,我們考慮Hp感染只不過為胃炎、消化性潰瘍的致病因素之一。中醫(yī)藥治療疾病確有其獨(dú)到之處,在注重局部病變的同時(shí),更注重整體的調(diào)節(jié)。所以,對(duì)于慢性胃炎和消化性潰瘍的治療,Hp應(yīng)受到重視,但更應(yīng)切記辨證論治原則。

本結(jié)果為陽(yáng)性胃炎和消化性潰瘍的治療提供了針對(duì)Hp感染的用藥依據(jù),而復(fù)方制劑與不同劑型的中藥對(duì)Hp的清除作用,目前仍在進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究中。

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