公開(公告)號
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CN1994465A
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公開(公告)日
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2007.07.11
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申請(專利)號
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CN200610104729.9
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申請日期
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2006.10.13
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專利名稱
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CCR5自體多肽疫苗及其制備方法
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主分類號
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A61K39/12(2006.01)I
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分類號
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A61K39/12(2006.01)I;A61P31/18(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學
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發(fā)明(設計)人
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張英起;吳孔田;韓 葦;李 萌;薛曉暢;孟潔如;包春杰;郝 強;李維娜;王增祿
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地址
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710032陜西省西安市長樂西路17號
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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西安通大專利代理有限責任公司
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代理人
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李鄭建
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國省代碼
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陜西;61
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主權(quán)項
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一種CCR5自體多肽疫苗,其特征在于,制得的該疫苗含有模擬CCR5胞外段結(jié)構(gòu)的rCCR5氨基酸片段和一個為增強疫苗免疫原性的T細胞輔助表位PADRE,所述的CCR5自體多肽疫苗即PADRE-rCCR5的氨基酸序列如下: Met Ala Lys Phe Val Ala Ala Try Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly Ser Asp Tyr Gln Val Ser Ser Pro Ile Tyr AspIle Asn Tyr Tyr Thr Ser Glu Pro Cys Gln Lys Ile Asn Val Lys Gln Ile Ala Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser TyrAla Ala Ala Gln Trp Asp Phe Gly Asn Thr Met Cys Gln Gly Gly Gly Gly Ser Arg Ser Gln Lys Glu Gly LeuHis Tyr Thr Cys Ser Ser His Phe Pro Tyr Ser Gln Tyr Gln Phe Trp Lys Asn Phe Gln Thr Leu Lys Gly GlyGly Gly Ser Asn Thr Phe Gln Glu Phe Phe Gly Leu Asn Asn Cys Ser Ser Ser Asn Arg Leu Asp Gln Ala Met T細胞輔助表位PADRE的氨基酸序列如下: AlaLysPheValAlaAlaTryThrLeuLysAlaAlaAla。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種CCR5自體疫苗及其構(gòu)建方法,根據(jù)CCR5的結(jié)構(gòu)應用氨基酸序列為GGGGS的linker將CCR5胞外段四個片段連接起來,模擬CCR5胞外段結(jié)構(gòu),將其稱為rCCR5,同時在rCCR5的N端插入T細胞輔助表位PADRE,應用人工合成的方法獲得了PADRE-rCCR5的基因,目的基因克隆入pBV-220原核表達載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌,在大腸桿菌中高效表達,經(jīng)包涵體洗滌,凝膠柱層析,透析復性獲得了純化的目的蛋白,以經(jīng)純化后得到目的蛋白PADRE-rCCR5作為CCR5自體多肽疫苗抗原免疫動物顯示,PADRE-rCCR5能誘導機體產(chǎn)生高滴度的CCR5特異性的抗體,應用流式細胞術(shù)檢測免疫抗血清對表達CCR5細胞株U937結(jié)果顯示,平均結(jié)合率達到75.8%。表明免疫抗血清對表達CCR5受體的細胞具有一定的結(jié)合能力,為構(gòu)建新型的CCR5自體疫苗和艾滋病疫苗研究奠定了一定的基礎。
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國際公布
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