| 公開(公告)號 | CN1453361A |
| 公開(公告)日 | 2003.11.05 |
| 申請(專利)號 | CN03128996.7 |
| 申請日期 | 2003.05.30 |
| 專利名稱 | 一種抗癌靶向可調(diào)控基因－病毒的構(gòu)建方法 |
| 主分類號 | C12N15/86 |
| 分類號 | C12N15/86;C12N15/63;C12N15/12;C12N15/861;C12N7/01;A61K48/00;A61P35/00 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 裴子飛;李兵華;鄒衛(wèi)國;孫蘭英;顧錦法 |
| 地址 | 200031上海市徐匯區(qū)岳陽路320號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 上海智信專利代理有限公司 |
| 代理人 | 肖劍南 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 一種抗癌靶向可調(diào)控基因-病毒的構(gòu)建方法，其特征在于包括下列步驟：一、克隆質(zhì)粒pRS-hTERT/Trail的構(gòu)建反式作用元件表達(dá)盒，即表達(dá)盒-1的構(gòu)建：用限制性內(nèi)切酶消化質(zhì)粒pAd/hTERT，回收hTERT啟動子片段再插入到克隆載體pBluescript的多克隆位點，得到pBS-hTERT；用限制性內(nèi)切酶切割pBS-hTERT，將含有hTERT啟動子片段克隆到pRS-17的相應(yīng)位點，替換出pRS-17原有的TTR啟動子，得到質(zhì)粒pRS-hTERT；抗癌基因表達(dá)盒，即表達(dá)盒-2的構(gòu)建：從pCA13-Trail中用限制性內(nèi)切酶切出Trail基因，克隆到中間載體的相應(yīng)位點，然后再通過基因克隆的方法插入pRS-hTERT的ClaI位點，得到克隆質(zhì)粒pRS-hTERT/Trail；二、包裝質(zhì)粒pGL-hTERT/Trail的構(gòu)建用限制性內(nèi)切酶把克隆質(zhì)粒pRS-hTERT/Trail的兩個表達(dá)盒切出，連接到質(zhì)粒pGL的酶切位點上，得到包裝質(zhì)粒pGL-hTERT/Trail；三、病毒的包裝用限制性內(nèi)切酶切割包裝質(zhì)粒pGL-hTERT/Trail使之線性化，與輔助病毒共轉(zhuǎn)染到包裝細(xì)胞293Cre4中；四、病毒的收集純化挑選單克隆，鑒定后大規(guī)模培養(yǎng)，收集細(xì)胞培養(yǎng)物，經(jīng)梯度離心純化病毒。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種抗癌靶向可調(diào)控基因-病毒的構(gòu)建方法。本發(fā)明構(gòu)建了攜帶有反式作用元件(trans-activator，TA)表達(dá)盒以及抗癌基因表達(dá)盒的無腸腺病毒或AAV。這兩個表達(dá)盒結(jié)構(gòu)相對獨立、功能直接相關(guān)，使得目的基因的表達(dá)受hTERT控制僅限于腫瘤細(xì)胞并受小分子藥物RU486的誘導(dǎo)，需要時打開，不需要時關(guān)閉，這樣既避免了外源基因產(chǎn)物對正常組織的傷害，也實現(xiàn)了外源基因的長久表達(dá)(至少一年以上)�？朔藗鹘y(tǒng)的腺病毒載體靶向性差、目的基因表達(dá)不受控制以及表達(dá)時間短等缺點。本發(fā)明構(gòu)建的無腸腺病毒載體，可以開發(fā)出有效的治療腫瘤的抗癌新藥。 |
| 國際公布 |
