| 公開(公告)號 | CN1475576A |
| 公開(公告)日 | 2004.02.18 |
| 申請(專利)號 | CN02125767.1 |
| 申請日期 | 2002.08.16 |
| 專利名稱 | 一種單鏈DNA快速制備技術及試劑盒 |
| 主分類號 | C12P19/34 |
| 分類號 | C12P19/34;C12Q1/68 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 趙翀 |
| 發(fā)明(設計)人 | 趙翀 |
| 地址 | 100083北京市海淀區(qū)學院路丁11號西二樓408室 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權項 | 一種單鏈DNA快速制備技術和試劑盒，至少包括下述步驟：①提供一種生物微粒，在模板的擴增反應中作為固相引物；其固相基質(zhì)表面連接的寡核苷酸分子的序列與模板核酸分子互補；②將生物微粒與模板核酸分子，非固相引物、dNTPs與DNA聚合酶等混合，在生物微粒表面，通過固相聚合酶鏈反應(PCR)對模板核酸分子進行擴增；其中非固相引物或dNTPs中有一個可以是同位素、熒光素、生物素、半抗原、糖或多糖等的標記物；擴增反應至少完成一個循環(huán)，此循環(huán)包括a)加熱變性；b)退火；c)在DNA聚合酶的作用下，寡核苷酸引物延伸，并固定在微粒表面；③離心漂洗數(shù)次去除殘留的模板核酸分子、非固相引物、dNTPs與DNA聚合酶等；④加熱變性，使擴增的DNA互補雙鏈解鏈；⑤用分離器將固/液相分離，獲得不同的分別位于固相和液相的單鏈DNA。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種單鏈DNA快速制備技術及試劑盒的制備方法。該技術快速、靈敏、純度高，制備方法簡便、成本低，適合各種規(guī)模不同核酸樣品的DNA測序和探針制備。主要特征在于將一條引物通過固相合成或化學偶聯(lián)等方法固定在固相基質(zhì)微粒的表面獲得固相引物，以靶核酸為模板在固相基質(zhì)的表面進行固相PCR擴增，產(chǎn)物經(jīng)加熱變性，使DNA雙鏈解鏈，而由固相引物延伸獲得的DNA單鏈仍然保留在固相基質(zhì)的表面；分離固/液相獲得兩條互補的DNA單鏈。運用本發(fā)明制備的單鏈DNA和RNA可用于核酸的測序，反義寡核苷酸藥物的合成、單鏈探針的制備以及SELEX分子文庫的構建等，可廣泛地用于生物學、醫(yī)藥學、疾病預防、農(nóng)牧業(yè)、食品與衛(wèi)生、能源與化工、環(huán)境監(jiān)測以及醫(yī)學診斷與檢測等領域。 |
| 國際公布 |
