| 公開(公告)號(hào) | CN1186453C |
| 公開(公告)日 | 2005.01.26 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN03102260.X |
| 申請(qǐng)日期 | 2003.01.30 |
| 專利名稱 | 一種腫瘤細(xì)胞藥敏檢測方法及其檢測板 |
| 主分類號(hào) | C12Q1/04 |
| 分類號(hào) | C12Q1/04 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 崔克勤 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 崔克勤 |
| 地址 | 050091 河北省石家莊市新石北路368號(hào)金石工業(yè)園區(qū)2-2-220號(hào)泰倫生物有限公司 |
| 頒證日 | |
| 國際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 石家莊冀科專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 李羨民 |
| 國省代碼 | 河北;13 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種腫瘤細(xì)胞藥敏檢測方法，其特征在于，它分為預(yù)制檢測板階段和實(shí)驗(yàn)室檢測階段，所述預(yù)制檢測板階段包含如下步驟：A.準(zhǔn)備檢測板：選用每塊板上含有多排、每排設(shè)有多個(gè)藥檢孔的實(shí)驗(yàn)板作檢測板，要求檢測板無破損、污染和劃痕；B.消毒：用環(huán)氧乙烷消毒；C.配置藥物：選擇常用抗癌藥物，分別配置藥物溶液，濃度以下列公式計(jì)算：濃度＝成人常規(guī)靜脈用量/(成人標(biāo)準(zhǔn)體重×8％×1000)(％)；D.藥物加入：每孔加入藥物溶液10微升，全部藥檢孔加完后，將檢測板蓋蓋上，放入滅菌容器內(nèi)；E.固化：將裝有檢測板的容器放入凍干機(jī)內(nèi)，真空冷凍4小時(shí)，冷凍真空度為：102Pa，溫度：-20～-40℃，將藥檢孔內(nèi)的液體凍干成固體；F.包裝：將檢測板封裝在鋁箔袋內(nèi)，加入干燥劑；所述實(shí)驗(yàn)室檢測階段包含如下步驟：G..標(biāo)本留取取指尖大小的新鮮實(shí)體腫瘤組織標(biāo)本，立即裝入標(biāo)本瓶內(nèi)，若室溫放置，應(yīng)在2-6小時(shí)內(nèi)檢測完畢。H.標(biāo)本預(yù)處理：祛除標(biāo)本周圍的非腫瘤組織和壞死組織，用緩沖液沖洗2-3次，剪碎成粒徑不大于1毫米的碎塊；I.制備腫瘤細(xì)胞懸液：將腫瘤組織碎塊研磨過濾進(jìn)入緩沖液溶液內(nèi)，加入離心管內(nèi)離心操作6-10分鐘，棄去上清，用緩沖液混懸腫瘤細(xì)胞，再離心操作后棄去上清，將細(xì)胞混懸于DMEM培養(yǎng)基中，使細(xì)胞計(jì)數(shù)為5×105/ml；若是血液、骨髓類液體標(biāo)本，則省去腫瘤組織剪碎、研磨工序；J.腫瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)：將檢測板預(yù)溫至37℃，將DMEM培養(yǎng)基亦預(yù)溫至37℃；每孔加細(xì)胞懸液200微升，輕輕搖蕩混勻；37℃度、5％CO2孵箱內(nèi)培養(yǎng)48小時(shí)；K.MTT還原每孔加入濃度為5mg/ml的MTT20μl，繼續(xù)培養(yǎng)3-24小時(shí)，至形成藍(lán)色針狀結(jié)晶為止；L.檢測：將檢測板離心操作8-10分鐘，棄去上清，用吸水紙吸去殘液；每孔加入二甲亞砜100微升，輕輕搖蕩混勻；用酶標(biāo)儀檢測各孔OD值，所述酶標(biāo)儀的檢測光的波長選定570nm；M.計(jì)算與判斷：抑制率(IR)＝(1-給藥孔平均OD值/對(duì)照孔平均OD值)×100％若：IR＞50％，判定為高度敏感；30％≤IR≤50％，判定為敏感；IR＜30％，判定為不敏感。 |
| 摘要 | 一種腫瘤細(xì)胞藥敏檢測方法及其檢測板，屬檢測技術(shù)領(lǐng)域，用于解決目前檢測中操作不標(biāo)準(zhǔn)、隨意性大、不便檢測的問題。其技術(shù)方案是，將檢測分為預(yù)制檢測板階段和實(shí)驗(yàn)室檢測階段，預(yù)制檢測板階段是將抗腫瘤藥物預(yù)先加入檢測板藥檢孔中，并予以冷凍固化，在檢測時(shí)，將腫瘤細(xì)胞加入藥檢孔中，利用MTT法還原成有色沉淀，再進(jìn)而制成有色溶液，經(jīng)酶標(biāo)儀測定后計(jì)算比較，求得藥敏數(shù)值，作出判斷。本發(fā)明可以使檢測方法標(biāo)準(zhǔn)化、商品化，極大地簡化了操作程序，提高了檢測的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，減少化療中的盲目性，指導(dǎo)臨床科學(xué)合理地用藥，提高化療的有效率。 |
| 國際公布 |
