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用于生產(chǎn)口蹄疫疫苗的油菜葉綠體轉(zhuǎn)基因植物的獲得方法

公開(公告)號 CN1212400C  
公開(公告)日 2005.07.27  
申請(專利)號 CN01145166.1  
申請日期 2001.12.31  
專利名稱 用于生產(chǎn)口蹄疫疫苗的油菜葉綠體轉(zhuǎn)基因植物的獲得方法  
主分類號 C12N15/33  
分類號 C12N15/33;C12N15/82;C12N15/90;A01H1/00;A61K39/12;A61P31/12  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 甘肅亞盛集團(tuán);中國科學(xué)院遺傳研究所  
發(fā)明(設(shè)計)人 周長生;陳正華;杜若甫;胡贊民;;石銳  
地址 730030 甘肅省蘭州市張掖路219號基隆大廈21層  
頒證日  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司  
代理人 李悅  
國省代碼 甘肅;62  
主權(quán)項 一種用于生產(chǎn)O型口蹄疫多肽疫苗的油菜葉綠體轉(zhuǎn)基因植物的獲得方法,包括以下步驟:(1)構(gòu)建用于向油菜葉綠體中定點轉(zhuǎn)化外源基因的油菜葉綠體相關(guān)DNA序列;(2)合成編碼O型口蹄疫多肽疫苗的基因序列,使該序列與報告基因或具有強(qiáng)免疫源性蛋白的基因串聯(lián)得到融合的O型口蹄疫多肽疫苗基因,所述編碼O型口蹄疫多肽疫苗的基因序列由SEQIDNO:3或SEQIDNO:4所示;(3)將步驟(1)構(gòu)建出來的DNA序列與步驟(2)合成的融合的O型口蹄疫多肽疫苗基因重組,使融合的疫苗基因序列位于油菜葉綠體相關(guān)DNA序列的中間;(4)將步驟(3)中重組得到的DNA片段插入到克隆載體的多克隆位點上,作為O型口蹄疫多肽疫苗基因油菜葉綠體定點轉(zhuǎn)化載體;和(5)用步驟(4)得到的轉(zhuǎn)化載體轉(zhuǎn)化油菜,獲得葉綠體表達(dá)O型口蹄疫多肽疫苗的轉(zhuǎn)基因植物。  
摘要 本發(fā)明涉及一種用于生產(chǎn)口蹄疫多肽疫苗的油菜葉綠體轉(zhuǎn)基因植物的獲得方法。方法包括:克隆油菜葉綠體基因組同源重組片段SEQ IDNO:1所示序列,以及SEQ ID:2所示序列,并用這兩個DNA片段構(gòu)建油菜葉綠體定點轉(zhuǎn)化載體,在載體上這兩個片段之間,插有口蹄疫多肽疫苗基因(即SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4所示序列)與綠色熒光蛋白或其它報告基因串聯(lián)而得的融合疫苗基因。并將融合基因插入一種克隆載體中。通過轉(zhuǎn)基因技術(shù),使該基因的同源重組序列與油菜葉綠體發(fā)生定點整合。再經(jīng)對油菜細(xì)胞的篩選與植株誘導(dǎo)與培育,最終獲得表達(dá)口蹄疫多肽疫苗的油菜葉綠體轉(zhuǎn)基因植物。  
國際公布  
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