公開(公告)號(hào)
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CN1244696C
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公開(公告)日
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2006.03.08
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN03131567.4
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申請(qǐng)日期
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2003.05.27
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專利名稱
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白細(xì)胞介素-12的高效表達(dá)方法
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主分類號(hào)
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C12N15/24(2006.01)I
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分類號(hào)
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C12N15/24(2006.01)I;C12N5/08(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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田志剛;劉文濤;魏海明
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地址
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230026安徽省合肥市金寨路96號(hào)
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頒證日
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國際申請(qǐng)
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司
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代理人
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沈 廉
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國省代碼
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安徽;34
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主權(quán)項(xiàng)
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一種白細(xì)胞介素-12的表達(dá)方法,其特征在于分別將IL-12的P40亞單位編碼區(qū)cDNA插入pcDNA3真核表達(dá)載體、將IL-12的P35亞單位編碼區(qū)cDNA插入pEE14真核表達(dá)載體,分別構(gòu)建pcDNA3/p40、pEE14/p35兩種表達(dá)效率不同的真核細(xì)胞重組質(zhì)粒,共轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞后,在篩選培養(yǎng)基中同時(shí)加入G418和甲硫氨酸亞砜進(jìn)行篩選,挑取存活的陽性克隆進(jìn)行鑒定,獲得高表達(dá)的IL-12的陽性克。挥甲硫氨酸亞砜對(duì)表達(dá)IL-12的陽性克隆進(jìn)行加壓擴(kuò)增,獲得具有產(chǎn)業(yè)化價(jià)值的高表達(dá)IL-12的工程細(xì)胞株。
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摘要
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白細(xì)胞介素-12的表達(dá)方法涉及一種由生物技術(shù)制備白細(xì)胞介素-12(IL-12)的方法,該方法分別將IL-12的P40亞單位編碼區(qū)cDNA插入pcDNA3真核表達(dá)載體、將IL-12的P35亞單位編碼區(qū)cDNA插入pEE14真核高效表達(dá)載體,分別構(gòu)建了pcDNA3/p40、pEE14/p35兩種真核細(xì)胞重組質(zhì)粒,共轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞后,在篩選培養(yǎng)基中同時(shí)加入G418和甲硫氨酸亞砜進(jìn)行篩選,挑取存活的陽性克隆,對(duì)各陽性克隆加壓擴(kuò)增,獲得高表達(dá)IL-12的工程細(xì)胞株。該方法簡(jiǎn)便的利用IL-12P40和P35天然表達(dá)不平衡的特性,采用兩種表達(dá)效率不同的載體,以使兩條鏈的表達(dá)盡量平衡。
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國際公布
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