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中藥決明子蛋白質(zhì)的提取方法和應(yīng)用

公開(公告)號 CN1317298C  
公開(公告)日 2007.05.23  
申請(專利)號 CN200510036856.5  
申請日期 2005.08.30  
專利名稱 中藥決明子蛋白質(zhì)的提取方法和應(yīng)用  
主分類號 C07K14/415(2006.01)I  
分類號 C07K14/415(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I;A61K36/482(2006.01)I;A61K38/02(2006.01)I;A61P3/06(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 華南師范大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計)人 李楚華;李續(xù)娥;郭寶江  
地址 510630廣東省廣州市天河區(qū)石牌  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構(gòu) 廣州粵高專利代理有限公司  
代理人 何淑珍  
國省代碼 廣東;44  
主權(quán)項 一種中藥決明子蛋白質(zhì)的提取方法,其特征在于包括如下步驟:(1)決明子粗蛋白的提取,包括:——在4-8℃條件下,將決明子碾碎后用石油醚或環(huán)己烷浸泡脫脂24-48小時,分2-4次進行;——回收溶劑,殘渣按1g:10ml-1g:50ml的體積浸泡于50mmol pH為8.0的KH2PO4-NaOH中8-12小時,重復(fù)3-5次,合并提取液;——提取液離心20-30min,取上清液;上清液邊攪拌邊加入硫酸銨至45%-55%的飽和度,離心分離,保留沉淀;沉淀物在分子量3,000-8,000的透析袋中進行脫鹽;——冷凍干燥儀中-20℃至-80℃溫度下進行冷凍干燥,得到粉末狀決明子粗蛋白,-20℃冷藏備用:(2)決明子粗蛋白的提純,包括:——將上述方法得到的粉末狀決明子粗蛋白充分溶解于15mmol-25mmol pH為7.0-8.0的Tris-HCl的緩沖液中;——用分子篩層析柱進行初步純化,分子篩層析柱上樣前先用含有0.15-0.3mol NaCl的上述緩沖液平衡2-5倍柱體積;每次上樣量為180μl-240μl,監(jiān)測波長為280nm,流速為0.3-0.7ml/min;決明子粗蛋白經(jīng)分子篩層析被分成5個峰:分別為peak1、peak2、peak3、peak4和peak5;(3)決明子蛋白質(zhì)peak2的分離純化,包括:用離子交換柱純化peak2,離子交換柱按照A液與B液依次交替的程序平衡,A液為15mmol-25mmol pH為7.0-8.0的Tris-HCl,B液為含有1.0mol NaCl的A液;將peak2濃縮、脫鹽,上樣量為25mg-50mg/ml;柱子用0-1.0mol的NaCl梯度、15mmol-25mmol pH為7.0-8.0的Tris-HCl的緩沖液進行洗脫,流速為0.8-1.5ml/min;peak2經(jīng)離子交換柱層析被分成3個峰,分別為:peak I、peak II和peak III,收集peakIII。  
摘要 本發(fā)明涉及分子量為19680的中藥決明子蛋白質(zhì)的提取方法,包括:決明子粗蛋白的提取;決明子粗蛋白的提純;決明子蛋白質(zhì)peak2的分離純化;得到的蛋白質(zhì)能顯著抑制細胞內(nèi)膽固醇的合成,具有明顯的降脂作用;本發(fā)明還涉及所述中藥決明子蛋白質(zhì)在制備降脂藥物中的應(yīng)用。  
國際公布  
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