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編碼新的融合蛋白的DNA和通過該DNA的表達(dá)來制備有用的多肽的方法

公開(公告)號 CN100338091C  
公開(公告)日 2007.09.19  
申請(專利)號 CN99120748.3  
申請日期 1999.09.25  
專利名稱 編碼新的融合蛋白的DNA和通過該DNA的表達(dá)來制備有用的多肽的方法  
主分類號 C07K14/32(2006.01)I  
分類號 C07K14/32(2006.01)I;C07K14/435(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N15/31(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 伊藤火腿株式會社;鵜高重三  
發(fā)明(設(shè)計)人 佐藤靜治;東久邇真彥;工藤季之;近藤雅昭  
地址 日本兵庫縣  
頒證日  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 中原信達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司  
代理人 丁業(yè)平  
國省代碼 日本;JP  
主權(quán)項(xiàng) 一種分離的DNA,其能夠在短芽孢桿菌(Bacillusbrevis)中生產(chǎn)外源多肽,包括與芽孢桿菌啟動子區(qū)的核酸序列的3’端連接并且編碼包含線性連接的第一,第二和第三序列的融合蛋白的核苷酸序列,其中所述第一序列的組成為自芽孢桿菌細(xì)胞壁蛋白(CWP)N末端開始的n個基酸殘基的序列,其中當(dāng)外源肽為人前胰島素時,n為6,7,8,10,11,12,15,17,20或50,當(dāng)外源肽為人胰高血糖素時,n為20,以及當(dāng)外源多肽為突變?nèi)?a class="channel_keylink" href="/pharm/2009/20090107113123_47580.shtml" target="_blank">生長激素時,n為1-12,14,20或30,第二序列的組成為一個或多個氨基酸殘基用于通過化學(xué)或酶法將所述第三序列與所述第一序列切開,所述第二序列在第三序列中不存在,以及第三序列包含的外源多肽序列選自人前胰島素,人胰高血糖素,和在N末端帶有甘氨酸或絲氨酸的突變人生長激素,由此所述第三序列能夠通過化學(xué)或酶法僅在所述第二序列處與所述第一序列切開。  
摘要 本發(fā)明涉及一種包含編碼融合蛋白的核苷酸序列的DNA、包含所述DNA的載體、包含所述載體的屬于芽孢桿菌屬的細(xì)菌和通過培養(yǎng)所述的細(xì)菌來制備有用的多肽的方法,其中所述的融合蛋白包括:由芽孢桿菌的細(xì)胞壁蛋白的信號肽序列、用于分離及純化所述融合蛋白的標(biāo)記序列、接頭序列、由用于化學(xué)或酶促裂解的序列、和外源多肽序列;所述的這些序列彼此按序線性連接,所述的信號肽序列、標(biāo)記和接頭是任選的序列,并且其中所述的核苷酸序列與包含芽孢桿菌啟動子區(qū)的核酸序列的3’-末端相連。  
國際公布  
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