| 公開(公告)號 | CN1244696C |
| 公開(公告)日 | 2006.03.08 |
| 申請(專利)號 | CN03131567.4 |
| 申請日期 | 2003.05.27 |
| 專利名稱 | 白細(xì)胞介素－12的高效表達(dá)方法 |
| 主分類號 | C12N15/24(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/24(2006.01)I;C12N5/08(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國科學(xué)技術(shù)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 田志剛;劉文濤;魏海明 |
| 地址 | 230026安徽省合肥市金寨路96號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 |
| 代理人 | 沈 廉 |
| 國省代碼 | 安徽;34 |
| 主權(quán)項 | 一種白細(xì)胞介素-12的表達(dá)方法，其特征在于分別將IL-12的P40亞單位編碼區(qū)cDNA插入pcDNA3真核表達(dá)載體、將IL-12的P35亞單位編碼區(qū)cDNA插入pEE14真核表達(dá)載體，分別構(gòu)建pcDNA3/p40、pEE14/p35兩種表達(dá)效率不同的真核細(xì)胞重組質(zhì)粒，共轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞后，在篩選培養(yǎng)基中同時加入G418和甲硫氨酸亞砜進(jìn)行篩選，挑取存活的陽性克隆進(jìn)行鑒定，獲得高表達(dá)的IL-12的陽性克��；用甲硫氨酸亞砜對表達(dá)IL-12的陽性克隆進(jìn)行加壓擴(kuò)增，獲得具有產(chǎn)業(yè)化價值的高表達(dá)IL-12的工程細(xì)胞株。 |
| 摘要 | 白細(xì)胞介素-12的表達(dá)方法涉及一種由生物技術(shù)制備白細(xì)胞介素-12(IL-12)的方法，該方法分別將IL-12的P40亞單位編碼區(qū)cDNA插入pcDNA3真核表達(dá)載體、將IL-12的P35亞單位編碼區(qū)cDNA插入pEE14真核高效表達(dá)載體，分別構(gòu)建了pcDNA3/p40、pEE14/p35兩種真核細(xì)胞重組質(zhì)粒，共轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞后，在篩選培養(yǎng)基中同時加入G418和甲硫氨酸亞砜進(jìn)行篩選，挑取存活的陽性克隆，對各陽性克隆加壓擴(kuò)增，獲得高表達(dá)IL-12的工程細(xì)胞株。該方法簡便的利用IL-12 P40和P35天然表達(dá)不平衡的特性，采用兩種表達(dá)效率不同的載體，以使兩條鏈的表達(dá)盡量平衡。 |
| 國際公布 |
