復(fù)方丹參滴丸—人參皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的測(cè)定—高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中人參皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的含量。

本方法適用于中藥制劑復(fù)方丹參滴丸。

供試品加雙蒸水進(jìn)行超聲，放冷，濾過(guò)，濾液上ODS固相萃取柱，分別收集40%、50%甲醇和65%、 70 %甲醇洗脫液，于水浴蒸干，殘?jiān)�加入流�?dòng)相溶解，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用ELSD檢測(cè)器檢測(cè)人參皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的吸收值，計(jì)算出其含量。

1. 乙腈（色譜純)

2. 甲醇（色譜純)

3. 異丙醇

4. 醋酸氨

5. 醋酸

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

大連伊利特Hypersil氨基柱（200×4.0mm，5μm)。

1.3 ELSD檢測(cè)器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：乙腈 異丙醇 10mol/L醋酸氨水溶液（冰醋酸調(diào)pH5.0)= 15 4 1

2.2柱溫：室溫

1. 稱取供試品

精密稱取本品樣品適量（約0.25g)。

2. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取人參皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1對(duì)照品適量，用甲醇溶解配制成0.2mg/mL的對(duì)照品溶液。

3.供試品溶液的制備

將供試品置錐形瓶中，精密加入三蒸水8mL，超聲處理10min，過(guò)濾，取濾液。精確移取2mL加于已處理好的ODS固相萃取柱（10mL甲醇活化，5mL水平衡)，先用20%甲醇3mL淋洗，然后用40%、50%甲醇各3mL洗脫，一齊收集為A液；再用65%、70%甲醇各3mL洗脫，一齊收集為B液。于水浴蒸干。殘?jiān)�精確加入1mL流動(dòng)相溶解，過(guò)0.45μm濾膜，取續(xù)濾液備用。A液作為測(cè)定人參皂苷Rg1和三七皂苷R1的供試液，B液作為人參皂苷Rb1的供試液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密吸取上述對(duì)照品溶液5，10，25，40，50μL注入高效液相色譜儀，用ELSD檢測(cè)器，測(cè)定人參皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的響應(yīng)值，以最小二乘法進(jìn)樣量對(duì)數(shù)對(duì)峰面積對(duì)數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程。

2. 供試品的測(cè)定

精密吸取供試品溶液5μL注入高效液相色譜儀，用ELSD檢測(cè)器，測(cè)定人參皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的響應(yīng)值，計(jì)算出其含量。

黃永焯，王寧生. HPLC-ELSD法測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中人參皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的含量. 中藥新藥與臨床藥理，2002，13（3)：174-200.