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2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
2.1HPLC法測(cè)定硫酸嗎啡的含量與限度
2.1.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-乙腈-0.5%醋酸銨溶液-三乙胺(12.5∶12.5∶75∶0.06)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為287 nm。流速：1.0 ml/min。理論塔板數(shù)按硫酸嗎啡峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。
2.1.2對(duì)照品溶液的制備取硫酸嗎啡對(duì)照品約10 mg，精密稱(chēng)定，置50 ml容量瓶中，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1毫升含硫酸嗎啡0.2 mg)。
2.1.3供試品溶液的制備取本品約10 g,精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中加濃氨水20 ml,碳酸氫鈉4 g,攪拌均勻，放置30 min，加入乙醚150 ml,振搖10 min，超聲提取10 min，離心,浸出上清液，殘?jiān)儆靡颐殉曁崛纱�，每�?20 ml,合并提取液，水浴下?lián)]干，殘?jiān)脽o(wú)水甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至10 ml容量瓶中，用無(wú)水甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。
2.1.4陰性樣品溶液的制備取缺罌粟殼的陰性樣品10 g，精密稱(chēng)定，依供試品溶液同法操作制備陰性樣品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算硫酸嗎啡的含量。色譜圖見(jiàn)圖1。
圖1HPLC色譜圖(略)
a: 樣品溶液; b: 對(duì)照品溶液; c: 空白
2.2系統(tǒng)適用性試驗(yàn)理論塔板數(shù)：n= 5.54(tR/Wh/2)2=5.54(3.67/0.15)2 =3316。分離度：R=2(tR2-tR1)/(W1+W2)=2(3.7-3.4)/(0.15+0.4)=1.1。
2.3線性范圍的考察精密稱(chēng)取硫酸嗎啡對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含嗎啡0.5 mg的溶液。精密吸取儲(chǔ)備溶液0.4、2、4、6、8 ml置10 ml容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度。吸取對(duì)照品溶液10 μl注入高效液相色譜儀，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。在21.8～436.0 μg/ml范圍內(nèi)，硫酸嗎啡有良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為：Y=1 417.9X+1 330.7，r=0.999 8。含量測(cè)定樣品濃度與添加回收實(shí)驗(yàn)樣品濃度均在此范圍內(nèi)。
2.4檢測(cè)限和定量限的考察取硫酸嗎啡對(duì)照品溶液，用甲醇依次稀釋制成一系列溶液，按信噪比(S/N)為3，測(cè)得硫酸嗎啡檢測(cè)限為0.005 53 μg/ml;按信噪比(S/N)為10,測(cè)得硫酸嗎啡定量限為0.016 6 μg/ml。
2.5精密度考察取同一批樣品(批號(hào)：060801)制備供試品溶液1份，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄硫酸嗎啡峰面積，并計(jì)算出RSD為0.87%，表明儀器精密度良好醫(yī).學(xué).全.在.線jfsoft.net.cn。
2.6重復(fù)性考察取同一批樣品(批號(hào)：060801)制備供試品溶液6份，按“2.1”項(xiàng)下方法平行制備樣品溶液并測(cè)定，結(jié)果硫酸嗎啡RSD為1.34%，表明本方法重復(fù)性符合分析要求。
2.7穩(wěn)定性考察取供試品溶液在0、2、4、6、8、12、24、48、72 h分別進(jìn)樣測(cè)定硫酸嗎啡含量,考察其72 h內(nèi)穩(wěn)定性。結(jié)果日內(nèi)和日間RSD分別為0.80%、0.89%。其峰形和含量變化不大，表明樣品溶液在72 h穩(wěn)定。
2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱(chēng)取供試品5 g共9份，另取0.218 mg/ml的硫酸嗎啡對(duì)照品溶液5 ml置50 ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，三組分別加入上述稀釋的硫酸嗎啡對(duì)照品溶液各1、2、3 ml，一份不加對(duì)照品溶液，依供試品溶液制備方法同法操作，濾過(guò)后，分別取上清液進(jìn)樣10 μl，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1回收率結(jié)果(略)
