β-半乳糖苷酶試驗(yàn)

1．原理

某些細(xì)菌具有β半乳糖苷酶，該酶可分解鄰-硝基苯-β-D-半乳糖苷（ONPG)，生成黃色的鄰-硝基酚。

2．方法

用接種環(huán)在三糖鐵培養(yǎng)基上刮取一環(huán)18小時(shí)菌齡的菌苔，加于無菌鹽水0.25 ml中制成濃厚的菌懸液，加入甲苯1滴，充分振搖，將試管置于37℃水浴中5分鐘，加入ONPG溶液0.25 ml，在37℃水浴中保溫，于20分鐘、4小時(shí)、18小時(shí)和24小時(shí)觀察結(jié)

果。

3．結(jié)果

出現(xiàn)黃色為陽性反應(yīng)，不變色為陰性反應(yīng)。通常在20～30分鐘內(nèi)顯色。

4．意義

此試驗(yàn)是測定不發(fā)酵或遲發(fā)酵乳糖的細(xì)菌是否產(chǎn)生半乳糖苷酶。由于細(xì)菌分解乳糖要有兩種酶，一是半乳糖昔滲透酶，另一是半乳糖苷酶。當(dāng)缺乏滲透酶時(shí)，乳糖不能進(jìn)入細(xì)胞，乳糖分解就不能進(jìn)行。這兩種酶都是在乳糖存在的條件下誘導(dǎo)細(xì)菌產(chǎn)生。迅速及遲緩分解乳糖的細(xì)菌ONPG為陽性，如埃希菌屬、枸櫞酸桿菌屬。不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌為陰性，如沙門菌屬、變形桿菌屬�？捎帽驹囼�(yàn)作為遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定方法。

5．試劑

（1)緩沖液：稱磷酸二氫鈉（NaH₂PO₄)6.9 g，溶于水45 ml中，用30％氫氧化鈉調(diào)整pH值為7.0，再加水至50ml，保存在4℃冰箱備用。用前若有結(jié)晶可加溫溶解。

（2)ONPG溶液：用ONPG 80 mg溶于水15ml中，再加入緩沖液5 ml，即成0.75 mol／L ONPG溶液。保存在4℃冰箱中，該溶液應(yīng)為無色，若出現(xiàn)黃色，應(yīng)棄之不用。